本文采用细胞融合手段，对所选用的灵芝菌丝体进行原生质体制备、融合及再生培养等育种研究，旨在选育功能成分含量高，特效性强，生产性状好的灵芝新品种。菌丝特征观察结果表明，14个供试菌株生长速率不等，白芝最快，其次为甜芝、仙芝、日本红芝，其它菌株长速较慢。菌丝色泽和外观分为白色绒状、乳白毡状、黑色绒状三类。菌丝为管状多细胞结构，双核，有分支，有明显的锁状联合。拮抗试验结果显示，14个菌株91个组合中有拮抗现象的共81组，其中68组拮抗现象非常明显，13组拮抗现象不明显。苯酚-硫酸法测定菌质多糖结果显示，菌质多糖含量比纯甘草渣基质的有不同程度的提高，其中赤芝12号提高了2.3倍，白芝提高了0.2倍。 酯酶同工酶分析共检出104条谱带，其中迁移率不同的有18条，在Rf0.016～0.807之间，酶带数分别为4～10条，多为6～9条。聚类统计分析结果表明：在相似水平为50％时供试菌株聚合为五类：第一类包括以韩芝为代表的6个菌株；第二类包括以赤芝为代表的4个菌株；第三类包括紫芝和黑芝；第4类为血芝；第5类为白芝。聚类分析结果与拮抗试验结果基本一致。 原生质体分离和再生研究结果显示：采用玻璃纸法在琼脂平板培养基上，28℃培养灵芝菌2～3天，然后将小菌丝块置于pH6.0，0.6mol/L甘露醇配置的2％溶壁酶液中，30℃酶解120min，原生质体得率达到15.5×105个/mL。将原生质体过滤纯化，用双层培养法于纤维二糖再生培养基中，28℃进行再生培养，上层培养基琼脂浓度为0.8％，下层培养基琼脂浓度为1.5％，原生质体再生率达到2.5×10-3％，单、双核再生菌落比例为1：3.2。 赤芝12号和白芝的种间单核原生质体融合研究显示，化学融合结果：促融剂30％PEG(含0.02mol/LCaCl2)，30℃保温30min，融合率达到4.0×10-3。电融合结果：交变电压40V，频率2MHz，直流脉冲电压500V，脉幅10kV/cm，脉宽25μs，融合率达到40％。 融合子筛选结果：融合再生菌落共103个，化学融合再生率1.5×10-3％，电融合再生率2.0×10-3％。再生菌落及菌丝锁状联合观察筛选得到12个融合株。拮抗试验筛选出GLA-5、GLA-10、GLA-12三个异源融合株。生长性状比较显示，GLA-5和GLA-12的菌丝长速较快，生活力强，菌丝外观与双亲相近，都呈白色绒状，GLA-10的菌丝为乳白色绒状，菌落稀疏，生长速度缓慢。酯酶同工酶分析显示，GLA-5较亲本有一条酶带缺失，酶带颜色淡；GLA-10较亲本也有一条酶带缺失，酶带颜色淡GLA-12有两条酶带缺失，酶谱上部和中部表现出双亲酶带的“累加性”。菌质多糖含量测定结果表明，GLA-12的多糖含量较双亲分别提高92.3％和8.7％。 本文实验对灵芝的原生质体融合及融合子筛选进行了研究，融合株正在扩大培养中，诸如出菇试验，融合子的遗传稳定性分析、以及有效成分分析等工作有待进一步完成，以筛选出符合育种目的的新菌株。