温清饮对皮肤表皮终末分化蛋白FLG表达的影响

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第一部分温清饮液对角质形成细胞的增殖及分化的影响目的:研究温清饮(WQY)对体外培养的角质形成细胞增殖及丝聚合蛋白表达的影响,探讨温清饮治疗银屑病的可能机制。方法:体外培养永生化的人类皮肤良性角质形成细胞株HaCaT细胞;通过倒置显微镜观察细胞形态变化;采用CCK-8法测定不同浓度中药对HaCaT细胞增殖的影响;采用半定量RT-PCR法检测不同浓度中药作用HaCaT细胞48h后表皮终末分化蛋白丝聚合蛋白(filaggrin,FLG)mRNA表达水平。结果:(1)不同浓度温清饮对HaCaT细胞的增殖均有抑制作用,最小抑制浓度为5mg/ml,且呈剂量依赖性(P<0.05);(2)经10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml温清饮处理后的HaCaT细胞丝聚合蛋白mRNA表达水平明显高于未经药物处理的HaCaT细胞,而且不同浓度温清饮处理后的HaCaT细胞其mRNA的表达水平均有显著差异(P<0.01)。结论:温清饮能抑制HaCaT细胞的增殖,促进HaCaT细胞的分化,可能对银屑病的治疗有一定的积极作用。第二部分温清饮软膏对小鼠特应性皮炎的影响目的:研究温清饮对特应性皮炎动物模型小鼠的治疗作用及其可能机制。方法:利用5%2,4-二硝基甲苯刺激小鼠背部皮肤制备动物特应性皮炎模型,造模成功后,观察温清饮治疗后(以卤米松乳膏为治疗对照)皮肤组织病理学的变化,并应用免疫组织化学方法检测治疗前后小鼠皮肤表皮FLG的表达情况。结果:(1)各实验组小鼠皮损及组织病理学变化:正常对照组无明显皮损产生,组织病理示轻度角化,稀疏淋巴细胞浸润;模型组小鼠皮损出现红肿、红斑、渗出、结痂、出血等表现,组织病理示角化过度、角化不全、棘层肥厚、轻度海绵状水肿、真皮浅至中层有大量淋巴细胞浸润、毛细血管明显扩张充血;WQY组皮损红斑、渗出较模型组减轻,组织病理示轻度角化过度、轻度海绵状水肿、真皮少量淋巴细胞浸润。(2)FLG在正常对照组小鼠皮肤及特应性皮炎模型组小鼠皮损角质层及颗粒层均有表达,胞质染色多见;但FLG在特应性皮炎小鼠皮损阳性染色结果明显低于正常对照组皮肤(1.8±0.262和4.8±0.185);特应性皮炎小鼠经温清饮治疗后其皮损处的FLG表达明显上升,接近正常水平。结论:我们外用DNCB致敏小鼠成功建立小鼠特应性皮炎模型;温清饮能上调皮炎小鼠皮肤表皮终末分化蛋白FLG的表达,从而对小鼠特应性皮炎样皮损产生抑制作用,这可能为临床AD的治疗提供了一定的理论依据。
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