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目的:创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)常继发肠道屏障功能障碍而影响疾病的转归。本研究旨在探讨miR-155在脑损伤后肠黏膜损伤中的作用及其机制。方法:在第一部分中,纳入49例TBI患者(病例组)和20例同期健康体检者(对照组),采用RT-qPCR的方法检测患者伤后24 h及健康体检者外周血清miR-155的表达,采用ELISA的方法检测患者反映肠黏膜上皮细胞损伤的血清指标二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lactic acid,D-LA)、内毒素(endotoxin,ET)、肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)以及急性反应期蛋白血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)的水平。在伤后6月以格拉斯哥预后量表评分将49例TBI患者分为预后良好和预后不良两组。在第二部分中,以健康成年雄性C57BL/6小鼠为研究对象,采用改良的自由落体法建立TBI模型,以腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)-DJ型为载体构建miR-155-5p inhibitor。将小鼠分为4组,包括Sham组、TBI组、Anti组和NC组。Sham组开骨窗,但不进行自由落体撞击;Anti组和NC组小鼠在自由落体撞击后缝合头皮前分别予以脑组织注射相应的AAV-mmu-mir-155-5p inhibitor和AAV-GP-1-NC(DJ)的病毒转染液。分别观察7 d、14 d小鼠血清及小肠黏膜miR-155的变化,小肠黏膜紧密连接clandin-1、occludin、紧密连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)等信使RNA(messenger RNA,mRNA)及蛋白的表达情况,以及肠黏膜的病理改变(HE染色和免疫组化染色)。在第三部分中,以Caco-2人结肠腺癌细胞为研究对象,以慢病毒为载体,构建pre-hsa-miR-155和hsa-mir-155-5p inhibitor。将培养的细胞分为4组:Blank组,不加入任何病毒,以新鲜细胞培养基替代;Pre组,加入pre-hsa-miR-155的病毒;Anti组,加入hsa-mir-155-5p inhibitor的病毒;NC组,加入LV3NC的病毒。在加入病毒后的第5天进行免疫荧光观察,并收集细胞,检测细胞miR-155表达水平,以及紧密连接clandin-1、occludin、ZO-1等mRNA和蛋白的表达情况。结果:在第一部分中,与对照组相比,病例组患者伤后24 h血清miR-155表达升高(P=0.031),血清DAO、D-LA及SAA表达升高(P均<0.05),血清ET、I-FABP有升高趋势,但无统计学意义(P均>0.05)。在49例TBI患者中,预后良好者18例(36.7%),预后不良者31例(62.3%)。MiR-155在预后良好组和预后不良组外周血的表达差异无统计学意义(P=0.838)。多因素logistics模型显示,高的血清DAO水平可增加TBI患者6个月预后不良的风险[OR=1.099,95%CI 1.021~1.183,P=0.012]。在第二部分中,与Sham组相比,TBI组造模后7 d、14 d血清及小肠黏膜miR-155的表达增加(P均<0.05),肠黏膜clandin-1、occludin和ZO-1等的mRNA及蛋白表达减少(P均<0.05),小肠黏膜损伤评分增加(P均<0.05),小肠黏膜免疫组化染色也提示clandin-1、occludin和ZO-1表达减少。与TBI组相比,Anti组造模后7 d、14 d血清及小肠黏膜miR-155的表达减少(P均<0.05),肠黏膜clandin-1表达增加(P均<0.05),而occludin和ZO-1等的mRNA及蛋白表达无明显变化(P均>0.05),小肠黏膜损伤评分减少(P均<0.05),小肠黏膜免疫组化染色提示clandin-1表达增加,而occludin和ZO-1表达无明显变化。在第三部分中,与Blank组比较,Pre组细胞miR-155的表达增加(P<0.001),clandin-1 mRNA及蛋白表达减少(P均<0.05),occludin和ZO-1等的mRNA及蛋白表达无明显变化(P均>0.05)。与Blank组比较,Anti组细胞miR-155的表达减少(P=0.002),clandin-1 mRNA及蛋白表达增加(P均<0.05),occludin和ZO-1等的mRNA及蛋白表达无明显变化(P均>0.05)。结论:(1)TBI后易出现肠道屏障功能障碍,反映肠黏膜上皮细胞损伤的指标(如血清DAO等)可望作为TBI后评估患者病情和预后的生物学标志物。(2)TBI后出现的血清及小肠黏膜miR-155表达的增加可以通过抑制claudin-1的表达而参与肠黏膜损伤的发生。(3)下调miR-155表达能增加肠黏膜claudin-1的表达而减轻肠黏膜损伤,这为防治肠屏障功能障碍提供了新的思路。