多西他赛(DTX)是一种化疗药物,可以通过抑制微管的解聚及使细胞周期阻滞发挥治疗作用,目前在临床上常被用于治疗转移性乳腺癌。乳腺癌是对当今女性的健康带来了严重影响的一种癌症。DTX作为一种治疗乳腺癌的化疗药物,其水溶性差,使用时需要添加增溶剂吐温80,但这种增溶剂会引起严重的过敏反应及其他不良反应,对机体正常细胞的损伤很大。因此,制备一种纳米载体选择性的将DTX运输到病灶部位来减少DTX用药时的副作用及不良反应是至关重要的。本研究首先制备了一种负载DTX的脂质聚合物纳米粒,纳米粒的组成成分为聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、聚乙烯亚胺(PEI)及卵磷脂(egg PC),其中PEI是一种阳离子纳米粒材料,它的高正电荷性质可以使这种聚合物吸引电负性的物质,如核酸、多糖和蛋白等。曲妥珠单抗(Tmab)是一种重组人源化单克隆抗体,能够特异性识别人表皮生长因子受体2(HER2)。因此,我们通过静电吸附作用将Tmab吸附在脂质聚合物纳米粒表面,通过这种柔和的方式尽量减轻对抗体的伤害,同时利用Tmab对HER2阳性乳腺肿瘤细胞的特异性识别能力来增强纳米载体的靶向性。具体内容如以下几部分:1.DTX的体外分析方法的建立及Tmab稳定性的研究本研究使用高效液相色谱(HPLC)法检测纳米粒的载药量及体外释放液中DTX的浓度,此法的专属性、准确度及精密度均良好。使用BCA蛋白浓度检测法检测Tmab的浓度,检测范围5.0-800.0μg/m L内线性关系良好,分别用圆二色谱法及荧光光谱法考察了Tmab在静电孵育液中二级和三级结构的变化,结果表明Tmab的二级和三级结构受静电孵育液的影响并不大。2.Tmab吸附的脂质聚合物纳米粒(e Tmab-PPLNs)的制备及处方筛选本部分主要用O/W乳化溶剂挥发法制备了脂质聚合物纳米粒,并用静电吸附法连接了Tmab。结果表明,经过优化的e Tmab-PPLNs的平均粒径为217.4±13.36 nm,多分散指数(PDI)为0.116±0.057,电位为0.056±0.315 m V,包封率在31%左右,且最优处方的重复性良好。3.e Tmab-PPLNs的理化性质的评估本部分主要是对得到的e Tmab-PPLNs进行表征,从透射电镜结果可以看出纳米粒表面光滑圆整且无粘连。体外稳定性实验中,e Tmab-PPLNs于不同环境下均表现出较好的稳定性。在体外溶血实验中,e Tmab-PPLNs造成的溶血率不高于2%,证明其生物相容性较好。选用两种乳腺肿瘤细胞BT474及MCF7来研究纳米载体的体外细胞杀伤力及体外细胞摄取。在体外细胞毒实验中,相比于未连接Tmab的PPLNs,e Tmab-PPLNs对乳腺癌HER2阳性细胞BT474的杀伤力较高,并且e Tmab-PPLNs对乳腺癌HER2阳性细胞BT474的杀伤力也是高于乳腺癌HER2阴性细胞MCF7的。同样的,在体外细胞摄取实验中,乳腺癌HER2阳性细胞BT474对e Tmab-PPLNs的摄取强于乳腺癌HER2阴性细胞MCF7,且对于BT474细胞而言,对e Tmab-PPLNs的摄取强于对PPLNs的摄取。这些结果表明了e Tmab-PPLNs能够通过Tmab的作用有效的将DTX运输到HER2过表达的乳腺癌细胞处,从而减少对机体正常细胞的伤害。综上所述,本文所制备的这种靶向递送DTX的纳米载体能够改变传统的DTX静脉注射的给药方式,避免由于增溶剂的使用而带来的不良反应,提高了DTX的生物利用度,减轻了对机体正常细胞的伤害,是一种很有前景可用于医治乳腺癌的DTX靶向递送系统。