论文部分内容阅读
酪蛋白巨肽(Casein Glycomacropeptide,CGMP)是一种来源于哺乳动物κ-酪蛋白,具有64个氨基酸残基(106-109)的糖肽。它是在干酪生产过程中,凝乳酶(或胃蛋白酶)水解κ-casein中Phe105-Met106的肽键所得到。CGMP具有不同的种类,主要是由于其不同的糖基化和磷酸化结构。CGMP已知具有多种生物活性,例如结合霍乱毒素和大肠杆菌毒素;抑制细菌和病毒的粘附作用;抑制胃液分泌;促进双歧杆菌增殖;调节免疫系统等。本文研究了胃蛋白酶水解酪蛋白制备CGMP的工艺条件,并发现了粗品CGMP对口腔致病菌-变形链球菌具有抑制作用。在本文中,CGMP是通过胃蛋白酶酶解牛乳酪蛋白产生的。实验研究了水解时间、温度、pH、酶与底物比这四个因素对CGMP生成量的影响。通过正交实验,得到最佳水解条件是:水解时间为40min,pH 1.8,温度为45℃,酶与底物比([E]/[S])为134.4U/g。通过间苯二酚-盐酸法,以CGMP标准品为对照,进行水解产物中CGMP的检测,实验结果表明:水解产物与CGMP标准品所显颜色相同。进而证明了该水解产物中确有CGMP存在。随后,实验通过间苯二酚-盐酸法,测定水解产物中唾液酸含量,并对照CGMP标准曲线,推算出水解产物中CGMP含量为30.74%。实验采用Tricine-SDS-PAGE电泳,对水解产物中的CGMP进行了鉴定,并考察其分子量的分布。实验结果表明水解产物中CGMP分子量约为7.0kDa和15kDa不等。采用滤纸片扩散法,研究粗品CGMP抑制变形链球菌生长的特性。实验发现:含有粗品CGMP的滤纸片周围抑菌圈清晰透明,证明粗品CGMP对变形链球菌具有明显的抑制作用。采用96-孔板法对粗品CGMP对变心链球菌的抑制作用进行定量研究。实验结果显示:粗品CGMP对变形链球菌的最小抑菌浓度为24mg/mL,此外当粗品CGMP浓度为12mg/mL、6mg/mL、3mg/mL时,粗品CGMP对变形链球菌的抑制率也较高,分别为:88%、73%、64%。