论文部分内容阅读
【目的】1.建立UVB急性光损伤动物模型;2.探究矢车菊素-3葡萄糖(C3G)苷以及纳米包被的矢车菊素-3葡萄糖苷(Nano-C3G)对UVB急性光损伤动物模型皮肤的影响并对比其效果;3.通过p53参与的线粒体细胞凋亡通路,探究上述影响因素的干预机制。【方法】1.外观:肉眼观察评估;2.皮肤水分及皮肤弹性:多头皮肤检测仪相应探头检测皮肤水分以及皮肤弹性;3.组织病理:皮肤组织苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法;皮肤组织TUNEL细胞凋亡免疫组织组化染色;4.氧化应激:硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO);5.DNA损伤:酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测8羟基脱氧鸟苷(8-OHd G);6.p53:免疫印迹法(Western blotting)检测p53表达水平;7.凋亡相关蛋白:a)酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测Bcl-2家族蛋白(Bax、Bcl-2);b)免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase家族(Caspase-3、Caspase-9);【结果】1.建立以高UVB剂量照射剃毛法除毛的昆明小鼠,并继续饲养24小时的急性光损伤模型。2.Nano-C3G(125-500u M)能改善UVB急性损伤小鼠皮肤外观、皮肤水分;TUNEL细胞凋亡指数下降;且同等高剂量条件下(500 u M),Nano-C3G药效较C3G强;3.Nano-C3G(125-500u M)能够有效降低UVB诱导的氧化应激产物LPO、MDA含量(p<0.0001);4.Nano-C3G(125-500u M)能够有效减少UVB诱导的8-OHd G(p<0.0001);且同等高剂量条件下(500 u M),Nano-C3G药效较C3G强(p<0.05);5.Nano-C3G(125-500u M)能够有效下调UVB诱导的p53表达(p<0.0001),平衡Bcl-2家族(抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax)(p<0.0001),下调Caspase家族(Caspase-3、9)表达(p<0.05);且同等高剂量条件下(500 u M),Nano-C3G药效较C3G强(p<0.05);【结论】1.UVB照射诱导小鼠皮肤角质形成细胞凋亡,可通过光动力性氧化应激损伤或非光动力性直接损伤DNA,激活p53基因表达,通过调控Bcl-2家族蛋白等一系列细胞因子,最终激活Caspase家族以启动凋亡级联反应;2.Nano-C3G、C3G能对抗UVB急性光损伤导致的小鼠皮肤表皮组织的细胞凋亡,且同等浓度下Nano-C3G的能力更强;3.Nano-C3G、C3G抑制UVB所导致的细胞凋亡,可以通过对抗其中的氧化应激反应、减少DNA损伤,降低p53基因表达,调控Bcl-2家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、抑凋亡蛋白Bax的表达,减少凋亡相关细胞因子的释放,最终减少Caspase家族表达实现。