【摘 要】
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背景和目的:肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）在世界范围内是最常见的几个恶性肿瘤之一。每年导致约80万人死亡。然而,HCC的发病机制尚不清楚。肝癌对放疗和化疗并不敏感,其常用的治疗方法包括手术切除、介入治疗、射频消融和肝移植。早期发现、诊断和手术切除是肝癌的主要治疗方法。然而现实中大多数病人发现时已处于疾病后期,错过了手术切除的窗口期,导致治疗效果不理想。因此,分
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背景和目的:肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）在世界范围内是最常见的几个恶性肿瘤之一。每年导致约80万人死亡。然而,HCC的发病机制尚不清楚。肝癌对放疗和化疗并不敏感,其常用的治疗方法包括手术切除、介入治疗、射频消融和肝移植。早期发现、诊断和手术切除是肝癌的主要治疗方法。然而现实中大多数病人发现时已处于疾病后期,错过了手术切除的窗口期,导致治疗效果不理想。因此,分析肝细胞癌的发病机制,找到延缓肝细胞癌进展并治疗肝细胞癌的方法已成为当务之急。长链非编码RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）是指几乎无编码蛋白能力且碱基长度＞200的RNA。大量的研究证据表明,lncRNAs在肝细胞癌的发生和发展、预后和治疗中发挥着重要的调控作用。MAPKAPK5-AS1（后简称MK5-AS1）主要通过顺式调节附近的基因MAPKAPK5和作为let-7f-1-3p分子海绵来促进结直肠癌进展。我们发现MK5-AS1在HCC组织和细胞中表达上调,提示MK5-AS1可能在HCC进展中起着关键作用。本研究探索了MK5-AS1对HCC的作用及其发挥作用的机制。方法:通过GEPIA在线分析,Kaplan-Meier Plotter分析了MK5-AS1在肝癌与癌旁的表达以及与病人预后关系,RT-PCR验证了MK5-AS1在肝癌细胞系以及临床病人肝癌及癌旁组织中的表达。使用慢病毒载体上调MK5-AS1在肝癌细胞系HLF和Alex中的表达。在Huh-7和97H细胞系中使用慢病毒载体抑制MK5-AS1的表达。为探究MK5-AS1对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响,我们利用细胞划痕和Transwell实验观察上调或抑制的MK5-AS1的表达对HCC细胞的作用。在体内水平,将97H以及HLF细胞通过裸鼠尾静脉注射来建立肝癌的肺转移瘤模型,进一步验证了MK5-AS1对肝癌细胞侵袭转移的影响。机制研究上,通过核质分离、RT-PCR、western blot技术、双荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP）等检测MK5-AS1对肝癌细胞作用的机制。结果:在HCC患者中,MK5-AS1在癌组织中表达明显高于相应的癌旁组织。MK5-AS1高表达的患者总生存期（OS,overall survival）以及无复发生存期（RFS,recurrence free survival）明显低于MK5-AS1低表达的HCC患者（P＜0.05）。通过定量PCR,我们发现MK5-AS1在肝癌细胞系中的表达普遍偏高。体外实验发现,上调HLF和Alex细胞系中MK5-AS1的表达能促进其侵袭和迁移能力,而下调MK5-AS1的97H和Huh-7细胞系侵袭和迁移能力明显受到抑制（P＜0.05）。体内实验也证实了过表达的MK5-AS1可促进HCC肺转移而敲减MK5-AS1抑制了肺部转移瘤的形成（P＜0.05）。基于Lncbase,miRDB和Target Scan数据库的生物信息学分析显示,MK5-AS1通过竞争性结合miR-376b-5p调控ECT2的表达。通过回复实验分析证明,过表达miR-376b-5p和下调的ECT2逆转了MK5-AS1对肝癌细胞的作用。结论:MK5-AS1是HCC中上调的lncRNA,与恶性肿瘤表型和患者生存差有关。MK5-AS1通过作为竞争性内源性RNA（ce RNA）,竞争性地结合miR-376b-5p并调节ECT2的表达,从而调控HCC的进展。我们的研究为MK5-AS1的转录后调控机制提供了新的见解,并提示MK5-AS1/miR-376b-5p/ECT2可能作为HCC潜在的治疗靶点和预后标志物。
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