论文部分内容阅读
背景: 由于吸烟、空气污染、不良的生活习惯及人口老龄化等因素，肺癌患病率逐年增加，给人类健康的带来巨大威胁。在对肿瘤组织进行基因分子分型检测，我们发现表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变的肺癌患者占有较高的比例，因此具有该基因突变的肺癌患者在首次使用针对EGFR基因突变的靶向药物如特罗凯（厄洛替尼）、易瑞沙（吉非替尼）等时，早期都取得不错的临床效果，但在经过治疗一段时间后都会无法避免地出现耐药现象，导致治疗失败。除了基因的改变与肿瘤的发生发展有着重要的关系，表观遗传的改变也起着重要的作用。近年来研究证实，异常的DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传学的改变，在肿瘤的发展中有着至关重要的作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)除通过对构成核小体结构的组蛋白乙酰化调节外，还可以对细胞内具有重要功能的非组蛋白乙酰化修饰调节，进而影响肿瘤细胞生物学功能，达到抑制增殖、促进凋亡的抗肿瘤效应。本研究通过体外SAHA、厄洛替尼单药及SAHA联合厄洛替尼对肺腺癌EGFR-TKI靶向耐药细胞株H1975的增殖、克隆、侵袭影响，探讨HDACi伏立诺他(vorinostat，SAHA）与厄洛替尼联合对H1975细胞是否具有协同抑制作用以及其可能的作用机制。 目的： 通过观察SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞株的生长、克隆及侵袭抑制作用，探讨潜在作用机制，在实验室层面寻找理论依据，为后续动物实验研究以及临床实验打下基础，最终期望能给肺癌EGFR-TKI继发性耐药患者寻找合适治疗手段。 方法： 1、CCK-8法检测SAHA单药、厄洛替尼单药及SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞株的生长抑制作用。 2、平板克隆试验检测SAHA单药、厄洛替尼单药及SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞株克隆率的形成。 3、Transwell小室检测SAHA单药、厄洛替尼单药及SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞侵袭率的形成。 4、Western Blot法分别检测SAHA单药、厄洛替尼单药及SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞细胞内PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达量。 结果: 1、CCK-8检测结果显示：SAHA作用于H1975细胞48h后的IC50为3.16μmol/L；厄洛替尼作用于H1975细胞48h的IC50为19.31μmol/L；生长抑制曲线显示，它们对细胞杀伤能力与浓度成正比。SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞生长抑制作用更显著；在各个组合浓度时，CI值均小于1，表明SAHA联合厄洛替尼具有协同效果。 2、平板克隆实验SAHA组细胞克隆形成率为41.90%，厄洛替尼组形成率48.11%；SAHA+厄洛替尼联组为17.89%，较单药组能显著抑制肿瘤细胞的克隆形成，差异有统计学意义（F=29.350，P＜0.001）。 3、Transwell小室侵袭实验SAHA+厄洛替尼组同单药组细胞相比，SAHA+厄洛替尼组透过Matrigel胶到达小室背面的细胞数显著降低，差异有统计学意义（F=29.350，P＜0.05）。 4、Western blot H1975细胞内的PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达水平SAHA联合厄洛替尼组较SAHA组及厄洛替尼组均下降显著，差异具有统计学意义（P＜0.01） 5、结论： SAHA联合厄洛替尼对H1975细胞的生长、克隆、侵袭具有协同抑制作用，可能与对PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制作用有关。