前言胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,更是引起恶性肿瘤患者死亡的第二大原因。胃癌在全球地理上的分布有广泛的国家间差异。高危险地区(男性年龄标准化发生率>20每100000人)包括东亚地区(中国,日本)、东欧和中南美洲的部分地区。在北美洲,胃癌相对少见,但其在恶性肿瘤死亡率中也占有相当大的比例。人类BCL2L10 (Bcl-B、Diva、Boo)基因位于人染色体15q12.2, mRNA全长887个核苷酸,cDNA全长615个核苷酸,表达含有204个氨基酸残基的蛋白,其分子量约为23kDa。BCL2L10表达有组织差异性,成人大脑、心脏、肾脏、脾脏、肝脏、结肠、肺脏、小肠、肌肉、胃、睾丸和胎盘中有表达,骨髓和所有的腺体有非常高的表达,然而,卵巢、子宫和前列腺组织中几乎没有BCL2L10的表达。同样,在不同癌组织中,其表达也存在着差异。滤泡性淋巴瘤不表达BCL2L10蛋白,18%的多发性骨髓瘤中表达BCL2L10,弥漫性大B细胞淋巴瘤则有近半数表达BCL2L10。而乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和小细胞肺癌中BCL2L10高表达。研究表明,BCL2L10表达与一些肿瘤不良预后的指标有相关性,如与乳腺癌的肿瘤高级别,与结直肠癌的微卫星稳定性和结直肠癌的解剖位置,与前列腺癌患者更高的死亡率,与小细胞肺癌更短的生存率之间均存在相关性。成人正常胃组织中,BCL2L10 mRNA表达水平非常高。也有研究报道胃癌组织中BCL2L10蛋白高表达,而其高表达与癌组织高分化有关,这样的结论显然是相互矛盾的。我们没有检索到BCL2L10与胃癌患者预后有意义联系的报道。BCL2L10是Bcl-2家族最近被发现的蛋白成员。Bcl-2家族至少有20种可以在哺乳动物细胞发挥促凋亡或者抗凋亡作用的蛋白。有趣的是,除了调节凋亡的中心作用,Bcl-2家族的一些蛋白也影响细胞周期,与凋亡调节功能一起,构成了它们在肿瘤发生中的重要作用。关于BCL2L10调节胃癌细胞生物学行为,国内外也未见相关报道。本课题试图从人胃癌组织、人胃癌细胞株和裸鼠移植瘤模型三方面对BCL2L10与胃癌患者预后、与胃癌细胞生物学行为的相关关系及其分子机制进行研究。本课题的研究不仅对了解肿瘤的生物学特性具有明显的理论意义,而且也具有显著的临床价值和社会效益。第一部分BCL2L10蛋白的低表达提示胃癌患者的预后不良目的：探究BCL2L10在胃癌细胞中的表达水平,以及它对胃癌患者临床和预后的意义。方法和结果：我们应用免疫组织化学方法检测了213例胃癌组织BCL2L10的蛋白表达。免疫组织化学结果显示了胃癌细胞中BCL2L10普遍低表达。BCL2L10表达等级数据分成3组(组0到组2),以利于统计分析。完成数据统计分析后发现,BCL2L10低表达与较短的肿瘤相关生存率有显著的相关性(x2=81.55,P=1.956×10-18)。多因素回归分析指出BCL2L10低表达是胃癌的独立预后指标(P=4.883x10-8,HR=0.252)。受试者工作特征曲线(ROC curve)显示BCL2L10的面积为0.817(P=8.331×10-14),这说明BCL2L10低表达是胃癌的预后指标。为了加强和证实免疫组织化学结果的可靠性,我们通过实时定量PCR和免疫印迹检测10例新鲜胃正常组织、30例胃癌组织和6种胃癌细胞株中BCL2L10的表达水平,并且通过亚硫酸氢钠甲基化测序方法检测了胃正常组织和癌组织中BCL2L10基因启动子甲基化状态。实时定量PCR和免疫印迹的结果与免疫组织化学的结果一致,并经数据统计分析发现,基因启动子CpG岛高甲基化是胃癌组织中BCL2L10低表达的重要原因。小结：人胃癌组织中BCL2L10的表达广泛低于正常人胃粘膜上皮；人胃癌细胞中BCL2L10基因启动子的高甲基化是其低表达的重要原因；BCL2L10的低表达提示胃癌患者的预后不良。第二部分BCL2L10蛋白通过不同的通路调节胃癌细胞的凋亡和增殖目的：探究BCL2L10蛋白调节癌细胞凋亡和增殖的作用及其相关机制。方法和结果：我们通过流式细胞计数、荧光染色、裸鼠移植瘤模型和免疫印迹的方法研究了BCL2L10对胃癌细胞凋亡和增殖的调节作用。我们也应用相应的通路抑制剂来证实涉及凋亡或者增殖的主要通路。我们观察到胃癌细胞中上调的BCL2L10通过线粒体途径诱导凋亡,下调的BCL2L10通过PI3K/Akt信号通路促进增殖。小结：上调的BCL2L10蛋白通过线粒体途径诱导胃癌细胞凋亡；下调的BCL2L10激活PI3K/Akt信号通路,并通过后者促进胃癌细胞快速通过细胞周期G1/S期完成促增殖作用。上调BCL2L10后的促凋亡作用和下调BCL2L10后的促增殖作用很大程度上提示了BCL2L10是一种抑癌蛋白。