兔附睾蛋白BE-20抗原基因完整序列的克隆、测定,基因表达与功能的初步研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qinlou
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生殖与发育是生命科学研究的重要课题。作为体内高度分化的雄性生殖细胞,精子在发生、成熟的过程中,其基因表达具有严格的时空关系,特别是精子膜蛋白的合成与转化,大量附睾蛋白因子与之的相互作用,对于精子成熟,获能,精卵识别以及受精后个体的早期发育都起着十分重要的作用。因此,深入了解与精子细胞发育成熟有关的蛋白质的结构,功能以及基因表达不仅对生殖生物学的发展具有重要意义,而且,也将为探索免疫避孕的新途径这项直接关系到人口控制的世界性重大课题奠定理论基础。 本文采用RACE技术和根据高度同源基因设计引物直接进行PCR扩增的方法,对本小组过去研究的三种编码精子蛋白和附睾蛋白的cDNA片段(BS-17,HSD-2,BE-20)的5’未知序列进行了测定,经计算机辅助分析和GenBank同源性比较,成功地获得了特异性人精子膜蛋白BS-17、HSD-2抗原基因及兔附睾蛋白BE-20抗原基因的完整的编码序列。 研究结果表明,BS-17全长1890bp,开放阅读框架1632bp,编码544个氨基酸,估计蛋白抗原前体分子量60KDa,实际表观分子量约17.5KDa。同源性比较研究表明,BS-17是Calpastatin在睾丸组织中的一种特殊的表达形式。 HSD-2全长3648bp,开放阅读框架2289bp,编码763个氨基酸,估计蛋白抗原前体分子量87KDa。同源性比较研究表明,HSD-2和Alzheimer’s disease(老年性痴呆症)淀粉样A4蛋白前体属于同一蛋白抗原家族,而且与另一同家族蛋白抗原APPH(Amyloid precusor protein homology)高度同源。 BE-20抗原基因的序列全长585bp,开放阅读框架369bp,编码123个氨基酸,估计蛋白抗原分子量13KDa。 同源性比较表明,BE-20蛋白抗原基因与人附睾组织特异性蛋白HE4抗原基因具有76%的同源性。以编码成熟BE-20蛋白抗原的约0.5Kb的cDNA片段为探针,与人的17种组织来源的mRNA进行了Northern Blot分析,研究结果表明,BE-20抗原具有附睾组织特异性。
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