目的：采用双向凝胶电泳(two-dimensional gelelectrophoresis,2-DE)结合质谱分析技术比较对紫杉醇(paclitaxel, T)联合顺铂(cisplatin, P)新辅助化疗作用敏感的宫颈癌组织化疗前后蛋白质组的差异,建立TP化疗前后的宫颈癌2—DE图谱,识别和鉴定差异表达的蛋白质,初步确定宫颈癌中与TP作用相关的蛋白质,研究其作用机制,为改善宫颈癌患者TP新辅助化疗疗效、研制新的肿瘤靶向药物提供实验及理论依据。方法：1、选取6例宫颈癌住院病人,纳入标准为：①化疗前为局部晚期菜花型；②采用紫杉醇加顺铂新辅助化疗：均化疗1次,紫杉醇175mg／m2,顺铂60mg／m2；③化疗10天后评价疗效为显效,肿瘤体积缩小50%以上；④约化疗后15天行广泛性子宫切除术及盆腔淋巴结清扫术；⑤术后病理诊断均为中分化鳞癌。宫颈癌组织化疗前后标本收集后立即-80℃保存。提取组织总蛋白,采用2-DE分离蛋白质,经考马斯亮蓝染色、图像扫描,得到化疗前后的双向电泳图谱,采用PD-quest7.0软件进行匹配和差异分析,识别两组之间表达差异蛋白点。从胶中切取表达差异明显的蛋白点,用MALDI—TOF—TOF—MS方法进行质谱分析,获取质谱图,数据库搜索鉴定蛋白质。2、根据获得的差异蛋白的分类及抗体购买的难易程度选择4个差异表达蛋白,应用Westem Blot方法进行验证,检测其在以上6例宫颈癌组织标本中化疗前后的表达变化,观察它们在化疗前后的表达是否与蛋白质组学方法检测结果一致。以蛋白质组学所用提取的组织蛋白为研究对象,制备PAGE胶,测蛋白浓度后等量上样,SDS-PAGE电泳,PVDF转膜,脱脂奶粉封闭,抗体孵育,HRP-ECL发光法显色,胶片定影、扫描、分析。以GAPDH为内参。结果：1、建立了分辨率高、重复性好的宫颈癌化疗前后的双向凝胶电泳图谱。化疗前蛋白点598士64个,化疗后蛋白点673士79个,组间平均匹配率为85.4%。2、两组间差异表达蛋白质点数为102个,从中选择表达差异明显的13个点进行质谱分析,全部鉴定成功,其中化疗后与化疗前相比,11个蛋白下调,2个蛋白上调。化疗后表达下调的蛋白：辅肌动蛋白α1(actinin alpha 1)、核纤层蛋白B1 (lamin B1)、真核翻译延长因子1γ(Eukaryotic translation elongation factor 1 gamma)、烯醇化酶1(enolase 1)、膜联蛋白1 (annexinⅠ)、上皮细胞标记蛋白1(epithelial cell marker protein 1)、醛缩酶A(aldolase A)、热休克蛋白27(heat shock protein 27)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase)、角蛋白Ⅱ型(cytokeratin typeⅡ)、热休克蛋白70(heat shock protein 70);化疗后表达上调的蛋白：载脂蛋白A1(apolipoprotein A-1)、膜联蛋白V (annexin V)。差异蛋白可归纳为3类：①细胞骨架蛋白：辅肌动蛋白α1,核纤层蛋白B1,角蛋白Ⅱ型,膜联蛋白工,膜联蛋白V；②糖酵解酶类：烯醇化酶1,醛缩酶A,丙酮酸激酶；③其它：真核翻译延长因子1γ,上皮细胞标记蛋白1,热休克蛋白27,热休克蛋白70,载脂蛋白Al。3、选择HSP70、HSP27、烯醇化酶1、醛缩酶A用Western blot技术进行验证,结果显示这四种蛋白在化疗前组中的表达高于化疗后组。该结果与蛋白质组学研究结果一致。结论：1、本研究通过提取宫颈癌化疗前后的总蛋白质,进行双向凝胶电泳,建立了宫颈癌紫杉醇联合顺铂新辅助化疗前后的凝胶电泳图谱,并应用PD—quest7.0软件对获取的凝胶图像进行分析,发现差异表达蛋白质。表明TP能够导致人宫颈癌蛋白质表达谱的改变。2、本研究应用MALDI—TOF—TOF—MS方法分析部分差异表达明显的蛋白质点,获取肽质量指纹图谱,搜索数据库鉴定出了13个差异蛋白质。这些差异表达的蛋白质中,涉及肿瘤细胞骨架蛋白、糖酵解活动及分子伴侣等方面,揭示宫颈癌TP新辅助化疗影响了多个蛋白质的表达,TP可能是通过调节这些蛋白质功能来起作用的。3、Western blot验证结果显示HSP70、HSP27、烯醇化酶1、醛缩酶A在化疗前组中的表达高于化疗后组,与蛋白质组学研究结果一致。这些蛋白可能是抗癌药物靶点,下调其表达可能增加宫颈癌对TP的药物敏感性,有望成为临床治疗新靶点,改善TP疗效。