通过生物信息学的方法，分别从斑马鱼、日本青鳉、三刺鱼基因组分离到两个由不同基因编码的促乳素受体（我们命名为PRLR1和PRLR2）并从黑鲷中克隆得到其cDNA（sbPRLR1和sbPRLR2）。用已公开的PRLR的序列构建进化树，结果表明PRLR1和PRLR2分别聚类于不同的进化枝，它们源于鱼类特有的基因组复制，在四足类和无脊椎动物并没有这个现象。序列对比分析表明两个受体在结构上均与哺乳动物PRLR的长型很相似，和哺乳动物PRLR的中型和短型差异较大。尽管鱼类PRLR1和PRLR2在一些重要的功能结构域非常一致，比如细胞外WSXWS结构域，保守的两对二硫键和细胞内起重要信号传导的Box 1都非常相似，但是它们氨基酸序列的相似性只有30％左右。这种差异主要是由于二者胞内的结构大不相同。相对于PRLR1，鱼类的PRLR2细胞内并没有明显的Box 2，而且有4个比较大的片断的丢失。因此，-PRLR2比PRLR1少约100个氨基酸残基。用Real-time PCR（实时荧光定量PCR）研究了sbPRLR1和sbPRLR2的组织分布情况，结果表明sbPRLR1和sbPRLR2都在与渗透压调节密切相关的组织如鳃、肠和肾脏中的表达量较高。在鳃中，sbPRLR2的表达水平远远高于sbPRLR1。而在肠中，sbPRLR1的表达水平高于sbPRLR2。另外，sbPRLR1和sbPRLR2也广泛的分布在其他组织中，不过相对于渗透压调节的组织，表达量比较低。心脏和脾脏中甚至没有sbPRLR2表达。将sbPRLR1和sbPRLR2的cDNA（ORF）亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中，采用HEK293细胞瞬时转染的方法，同时使用马苏大麻哈鱼的促乳素（PRL）刺激转染细胞，通过检测PRLR下游三个不同的靶基因β-casein、c-fos和Spi 2.1的启动子-报告基因的荧光素酶活性信号，对SbPRLR1和sbPRLR进行了功能鉴定。研究结果发现，两个受体都可以激活β-casein和c-fos的启动子，但只有sbPRLR1可以激活Spi 2.1的启动子。这些结果表明两个受体在功能上非常相似但也有所不同。同时，在上述实验中，采用大麻哈鱼的生长激素（GH）、生长促乳素（SL）刺激转染后的HEK293细胞，发现二者都不能激活β-casein、c-fos和Spi 2.1的启动子活性。通过基因组DNA步行（Genome walking）的方法克隆到sbPRLR1和sbPRLR2的5’启动子区域。构建了sbPRLR1和sbPRLR2的5’启动子报告基因重组子，并通过转染金鱼的鳞片细胞系（GAKS细胞）进行了启动子离体分析。瞬时转染有sbPRLR1和sbPRLR2启动子报告基因重组子的GAKS细胞经不同的类固醇激素处理，发现雌激素（estradiol）和氢化可的松（cortisol）都可以促进sbPRLR1的启动子活性，而抑制sbPRLR2的启动子活性。雄激素（testosterone）则对sbPRLR2的启动子活性有抑制的作用，而对sbPRLR1没有影响。启动子的连续缺失突变试验结果表明，在sbPRLR1和sbPRLR2的启动子区域都可能存在对应于雌激素的雌激素受体结合元件（ERE）和糖皮质激素受体结合元件（GRE），而雄激素的受体结合元件（ARE）则只在sbPRLR2中才有。在体（In vivo）用不同的类固醇激素处理黑鲷之后，发现sbPRLR1和sbPRLR2在肾脏中的表达受类固醇激素调控的方式不同。Estradiol和cortisol可以提高sbPRLR1的表达，而Testosterone抑止sbPRLR2的表达。Cortisol和testosterone对sbPRLR1和sbPRLR2表达没有明显的影响。比较类固醇激素对sbPRLR1和sbPRLR2 mRNA表达和启动子的调控的结果发现二者是很相似的。在体实验结果进一步印证了离体启动子分析的结果。综上所述，本研究在基因组分析的基础上，从黑鲷成功克隆并初步鉴定了由两个不同基因所编码的PRLR。它们具有不完全相同的组织分布、功能和转录调节机制。这对从分子水平上阐明鱼类的渗透压调节机制和全面阐述PRL的功能将起到推动作用。