分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

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用纯化的伪狂犬病病毒(PrV)免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与NS0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA和固相化ELISA筛选,3次有限稀释法克隆,获得了1株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为OH6。经鉴定该单抗为IgG1亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为97条,杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1:1024和1:204800。OH6株单克隆抗体与猪繁殖-呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,显示良好的特异性。连续培养21代,OH6杂交瘤细胞株能稳定分泌抗体。利用OH6杂交瘤细胞株的小鼠腹水单克隆抗体建立了检测PrV的McAb-AC-ELISA检测方法。经测定,单克隆抗体的最适包被浓度为2.04ug/ml,兔抗PrV高免血清的最适工作浓度为1:8000。其检测灵敏度为5.5ng/ml,与常见的猪的几种传染病病原无交叉反应,与病毒分离对比检查试验有较高的符合率。用该检测方法对自然发病猪的组织脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑、扁桃体)进行检测,结果发现在扁桃体、脑和肺中PrV的检出率最高,其次为心、肝、脾、肾。McAb-AC-ELlSA的建立为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏、应用广泛的PrV检测方法。
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