目的:通过横断面研究卵巢功能下降对患者情志的影响,探讨卵巢功能下降影响情志的相关因素,通过队列研究补肾法治疗卵巢功能下降对其焦虑抑郁的影响,探讨原发病的治疗是稳定情志的基础。通过动物实验研究,探讨补肾填精法对卵巢功能下降的干预作用,为临床防治卵巢功能下降提供参考依据。方法:一、临床研究:收集2019年5月至2021年3月间在广州中医药大学第一附属医院就诊的93例卵巢功能下降患者作为观察组,包括42例早发性卵巢功能不全（POI）（基础卵泡刺激素（b FSH）>25IU/L）及51例卵巢储备功能减退（DOR）（抗苗勒管激素（AMH）<1.0 ng/ml或10IU/L≤b FSH≤25IU/L）。同期月经规则女性92例（b FSH<10IU/L）作为对照组。通过问卷收集年龄、体重指数（BMI）、婚姻状况、发病时间、生育要求、子女个数、伴随症状,月经情况、相关辅助检查（包括AMH、卵泡刺激素（FSH）、雌激素（E2）、促黄体生成素（LH））、综合医院焦虑/抑郁（HADS）量表积分进行横断面研究,并观察以补肾为基本原则治疗3个月后,HADS量表积分变化情况,采用SPSS 25.0软件进行统计分析。二、实验研究:8周龄SD雌性大鼠60只随机分为空白组、模型组、左归丸低剂量组、左归丸高剂量组、戊酸雌二醇低剂量组、戊酸雌二醇高剂量组,每组10只。建立化疗源性卵巢功能下降模型,分别在药物干预30天及60天后取材,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清中AMH、FSH、LH、E2含量。实时荧光定量核算扩增法（qPCR）检测卵巢中生殖干细胞标志物小鼠瓦萨同源物蛋白（Mvh）、八聚体结合转录因子4（Oct4）及相关基因Dazl、联会复合体蛋白3（SYCP3）、透明带蛋白1、2、3（ZP1、ZP2、ZP3）和Notch信号通路相关基因Notch1、Hes1、Hes5的表达。采用SPSS 25.0软件进行统计分析。结果:一、临床研究:（一）一般情况:本研究共收集191份问卷,其中93份观察组（包括51份DOR及42份POI）,92份对照组。对照组年龄为33（28.5,36）岁,观察组年龄为34（29,38）岁,其中DOR亚组为34（28.5,37）岁,POI亚组为35.5（30,38）岁。与对照组相比,观察组、DOR亚组年龄无统计学差异（P>0.05）,POI亚组年龄较大（P<0.05）。与对照组相比,观察组、DOR亚组、POI亚组BMI、婚姻状况、生育要求、子女个数间差异均无统计学意义（P>0.05）。发病时间方面,DOR亚组中发病1年内者40例（78.4%）,1-2年内者7例（13.7%）,2年以上者4例（7.8%）。POI亚组中发病1年内者14例（33.3%）,1-2年内者6例（14.3%）,2年以上者22例（52.4%）。DOR亚组与POI亚组发病时间构成比有显著差异（P<0.05）,但年龄、BMI,婚姻状况,生育要求,子女数、伴随症状间差异均无统计学意义（P>0.05）。（二）观察组与对照组焦虑、抑郁评分及患病率比较焦虑评分,对照组为3（2,5）分,观察组为5（3,8）分,其中DOR亚组为5（3,7.5）分,POI亚组为5（3,8）分,与对照组相比,观察组、DOR亚组、POI亚组焦虑评分明显上升（P<0.01）。抑郁评分,对照组为3（2,5.75）分,观察组为5（3,8）分,其中DOR亚组为6（3.5,9）分,POI亚组为3（2,5）分,与对照组相比,观察组抑郁评分明显上升（P<0.01）,其中DOR亚组抑郁评分明显上升（P<0.01）,POI亚组无统计学差异（P>0.05）。焦虑状态方面,对照组12人（13%）,观察组25人（26.9%）,其中DOR亚组13人（25.5%）,POI亚组为12人（28.6%）,与对照组相比,观察组焦虑患病率明显增高（P<0.05）,其中POI亚组焦虑患病率明显增高（P<0.05）,DOR亚组无统计学差异（P>0.05）。抑郁状态方面,对照组13人（13%）,观察组26人（26.9%）,其中DOR亚组18人（35.3%）,POI亚组8人（19%）,与对照组相比,观察组抑郁患病率明显增高（P<0.05）,其中DOR亚组抑郁患病率明显增高（P<0.05）,POI亚组无统计学差异（P>0.05）。DOR亚组与POI亚组间焦虑评分、抑郁评分、焦虑患病率、抑郁患病率差异均无统计学意义（P>0.05）。（三）卵巢功能下降焦虑、抑郁状态的相关因素焦虑状态方面,单因素分析发现,观察组焦虑状态的危险因素是未婚（P=0.018,OR=3.324）和伴随失眠、阴道干涩、乏力、怕冷、腹股沟隐痛等症状（P=0.013,OR=4.375）。与无子女者相比,观察组中育有一名子女者焦虑状态的的风险更低（P=0.034,OR=0.266）,育有两名子女者焦虑状态的的风险无统计学差异（P=0.073,OR=0.322）。多因素分析则发现未婚（P=0.009,OR=4.275）及伴随失眠、阴道干涩、乏力、怕冷、腹股沟隐痛等症状（P=0.008,OR=5.427）是观察组伴焦虑状态的独立危险因素。其中,POI亚组中,单因素及多因素分析均发现低龄患者焦虑状态的风险更高（P=0.047,OR=0.887）。DOR亚组中未发现影响焦虑状态的显著相关因素。抑郁状态方面,单因素及多因素分析均发现,观察组中,与发病2年以上者相比,发病一年内者伴抑郁状态的风险更高（P=0.04,OR=3.50）。其中DOR亚组抑郁状态的危险因素是年龄的增长（P=0.027,OR=1.162）。POI亚组中未发现影响抑郁状态的显著相关因素。（四）焦虑、抑郁状态的3个月随访观察组及对照组焦虑、抑郁评分及患病率3个月前后比较:焦虑评分方面,与3个月前相比,观察组及对照组3个月后焦虑评分变化无统计学差异（P>0.05）。抑郁评分方面,观察组3个月前为5（3,8）,3个月后为6（4,8）。对照组3个月前为3（2,5.75）,3个月后为3（1.25,5）。与3个月前相比,观察组3个月后抑郁评分明显升高（P<0.05）,对照组无统计学差异（P>0.05）。与3个月前相比,观察组及对照组3个月后焦虑、抑郁患病率均无统计学差异（P>0.05）。（五）补肾法对卵巢功能下降及焦虑、抑郁的影响1.补肾法对妊娠率及月经情况的影响观察组中以补肾为基本治法,连续3个月,每个月药物治疗15天以上者为治疗组,共40例,占45.9%（包括中药22例-以补肾为基本治法,中西结合18例-中药以补肾为基本治法,西药以激素替代治疗为主）。其余为非治疗组,共47例,占54.1%。观察组患者3个月前全为非妊娠状态且存在月经不规则,药物治疗3个月后,治疗组中妊娠率为5.0%（2/40）,非治疗组为0%（0/47）,两组妊娠率差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组中月经恢复正常比率为20.0%（8/40）,非治疗组为4.3%（2/47）,与非治疗组相比,治疗组月经恢复正常者较多,差异有统计学意义（P<0.05）。2.补肾法对焦虑、抑郁状态的影响（1）治疗组与非治疗组3个月前焦虑、抑郁评分及患病率的比较:两组间焦虑、抑郁评分无统计学差异（P>0.05）,焦虑、抑郁患病率无统计学差异（P>0.05）。（2）治疗组与非治疗组3个月后焦虑、抑郁评分及患病率的比较:焦虑评分,治疗组为4.975±2.796,非治疗组为6.243±2.755,与非治疗组相比,治疗组焦虑评分下降,但无统计学意义（P>0.05）,抑郁评分变化无统计学意义（P>0.05）。焦虑状态,治疗组4人（10.0%）,非治疗组20人（42.6%）,治疗组焦虑患病率明显低于非治疗组（P<0.05）。两组间抑郁患病率无统计学差异（P>0.05）。（3）焦虑、抑郁评分及患病率3个月前后的自身比较:焦虑评分,治疗组3个月前为5.511±3.507,3个月后为4.975±2.796。与3个月前相比,3个月后焦虑评分显著下降（P<0.05）。非治疗组3个月前为5.585±3.398,3个月后为6.243±2.755,与3个月前相比,3个月后焦虑评分明显升高（P<0.05）。抑郁评分方面,治疗组3个月前后无明显变化（P>0.05）。非治疗组3个月前为5.317±2.464,3个月后为6.073±2.218,与3个月前相比,3个月后抑郁评分明显升高（P<0.05）。焦虑、抑郁患病率方面,治疗组及非治疗组3个月前后比较无统计学差异（P>0.05）。3.中药与中西医结合的疗效比较（1）中药与中西医结合疗法对妊娠率及月经情况的影响比较:40例治疗组中包括中药组22例,中西结合组18例。药物治疗3个月后,中药组妊娠率为4.5%（1/22）,中西医结合组为5.5%（1/18）,两组妊娠率差异无统计学意义（P>0.05）。中药组中月经恢复正常比率为9.0%（2/22）,非治疗组为33.3%（6/18）,两组月经情况变化无统计学意义（P>0.05）。（2）中药与中西医结合疗法对焦虑、抑郁的影响比较:（1）中药组与中西医结合组3个月前焦虑、抑郁评分及患病率的比较:两组焦虑评分比较无统计学差异（P>0.05）。抑郁评分中药组为4.82±3.66,中西医结合组为7.28±3.58,中西医结合组抑郁评分较高（P<0.05）。但两组间焦虑、抑郁患病率无统计学差异（P>0.05）。（2）中药组与中西医结合组3个月后焦虑、抑郁评分及患病率的比较:两组间焦虑、抑郁评分无统计学差异（P>0.05）,焦虑、抑郁患病率无统计学差异（P>0.05）。（3）焦虑、抑郁评分及患病率3个月前后的自身比较:焦虑评分,中药组3个月前为5.23±2.96,3个月后为4.36±2.79。与3个月前相比,3个月后焦虑评分显著下降（P<0.05）。中西医结合组3个月前后焦虑评分变化无统计学意义（P>0.05）。抑郁评分方面,中西医结合组3个月前为7.28±3.58,3个月后为6.89±3.43,与3个月前相比,3个月后抑郁评分下降,但无统计学差异（P>0.05）。中药组3个月前后变化无统计学差异（P>0.05）。焦虑、抑郁患病率方面,中药组及中西医结合组3个月前后比较无统计学差异（P>0.05）。（六）新发焦虑、抑郁状态的相关因素1.焦虑、抑郁状态在3个月后的新发情况:焦虑新发率,观察组为12.3%（8/68）。对照组为1.4%（1/80）。与对照组相比,观察组焦虑新发率较高（P<0.05）。抑郁状态新发率,观察组为20.3%（13/67）。对照组为2.9%（2/79）。与对照组相比,观察组抑郁新发率较高（P<0.05）。2.新发焦虑、抑郁状态的相关因素:单因素及多因素分析发现,既往无焦虑、抑郁状态人群（包括观察组和对照组）3个月后新发焦虑状态的危险因素是3个月前较多的以焦虑为主的负面情绪,包括烦恼、紧张、恐惧等所导致的较接近轻度焦虑的评分（P=0.001,OR=2.513）。新发抑郁状态的危险因素是卵巢功能下降（P=0,OR=2.271）和3个月前较多的以情绪低落为主的消极情绪,包括沮丧、疲乏、悲观等所导致的较接近轻度抑郁的评分（P=0.037,OR=5.687）。二、实验研究:（一）一般情况与正常组相比,各实验组造模后均出现不同程度的毛发晦暗脱落,弓背,活动减少,进食减少等情况。不同剂量的左归丸及戊酸雌二醇干预30天及60天后,毛发光泽有不同程度恢复,甚至部分长出新生毛发,弓背持续时间减少,活动时间增加,进食情况较前有所改善,干预时间越长,变化越明显。（二）血清激素含量变化左归丸及戊酸雌二醇治疗30天后,血清AMH水平正常组80.64±18.65ng/ml,模型组为31.46±4.18ng/ml,左归丸低剂量组为46.70±11.27ng/ml,左归丸高剂量组为69.95±16.38ng/ml,戊酸雌二醇低剂量组为54.88±19.71ng/ml,戊酸雌二醇高剂量组为68.33±28.14ng/ml。与正常组相比,模型组血清AMH水平显著下降（P<0.01）,左归丸低剂量组、戊酸雌二醇低剂量组血清AMH水平明显下降（P<0.05）。与模型组相比,左归丸高剂量组及戊酸雌二醇组高剂量组血清AMH水平均显著上升（P<0.01）。其余组间比较无统计学差异。血清FSH、LH、E2水平各组间比较未见统计学差异（P>0.05）。左归丸及戊酸雌二醇治疗60天后,血清AMH水平,正常组为66.28±9.09ng/ml,模型组为40.58±16.75ng/ml,左归丸低剂量组为46.41±19.21ng/ml,左归丸高剂量组为51.56±14.39ng/ml,戊酸雌二醇低剂量组为42.24±9.06ng/ml,戊酸雌二醇高剂量组为49.45±17.12ng/ml。与正常组相比,模型组、左归丸低剂量组、戊酸雌二醇低剂量组血清AMH水平仍明显下降（P<0.05）。与模型组相比,左归丸高剂量组、戊酸雌二醇高剂量组血清AMH水平上升,但无统计学差异（P>0.05）。其余组间比较无统计学差异。血清FSH、LH、E2水平各组间比较未见统计学差异（P>0.05）。（三）生殖干细胞标志物及相关基因表达qPCR检测提示,造模结束后30天,相对正常组,模型组Mvh m RNA表达量为0.46±0.13,Oct4 m RNA表达量为0.41±0.16,ZP3 m RNA表达量为0.48±0.13,Dazl m RNA表达量为0.18±0.18。与正常组相比,模型组Mvh、Oct4、ZP3、Dazl表达量明显下降（P<0.05）。左归丸及戊酸雌二醇治疗30天后,Oct4 m RNA表达量,模型组为0.41±0.16,左归丸高剂量组为1.46±0.53,戊酸雌二醇低剂量组为1.63±0.85。与模型组相比,左归丸高剂量组及戊酸雌二醇低剂量组Oct4表达量明显上升（P<0.05）,左归丸低剂量组、戊酸雌二醇高剂量组无统计学差异（P>0.05）。ZP3 m RNA表达量,模型组为0.48±0.13,左归丸高剂量组为1.30±0.43,戊酸雌二醇低剂量组为1.40±0.51。与模型组相比,左归丸高剂量组及戊酸雌二醇组低剂量组ZP3表达量明显上升（P<0.05）,左归丸低剂量组、戊酸雌二醇高剂量组表达量变化无统计学差异（P>0.05）。与模型组相比,药物治疗后Mvh、Dazl表达量未见统计学差异（P>0.05）。各组间ZP1、ZP2、SYCP3表达量未见统计学差异（P>0.05）。造模结束后60天,相对正常组,模型组Mvh m RNA表达量为0.43±0.24,Oct4 m RNA表达量为0.38±0.01。与正常组相比,模型组Mvh、Oct4表达量明显下降（P<0.05）。ZP2 m RNA表达量,戊酸雌二醇低剂量组为5.02±0.44。与正常组的相比,戊酸雌二醇低剂量组ZP2表达量明显上升（P<0.05）,模型组,左归丸高、低剂量组,戊酸雌二醇高剂量组变化无统计学差异（P>0.05）。左归丸及戊酸雌二醇治疗60天后,Mvh m RNA表达量,模型组为0.43±0.24,左归丸高剂量组及戊酸雌剂量组为2.25±1.72,与模型组相比,左归丸高剂量组Mvh表达量明显上升（P<0.05）,左归丸低剂量组,戊酸雌二醇高、低剂量组变化无统计学意义（P>0.05）。Oct4 m RNA表达量,模型组为0.38±0.01,左归丸高剂量组为3.05±0.91,戊酸雌二醇高剂量组为4.03±2.11。与模型组相比,左归丸高剂量组及戊酸雌二醇组高剂量组Oct4表达量显著上升（P<0.01）,左归丸低剂量组、戊酸雌二醇低剂量组变化无统计学意义（P>0.05）。ZP1 m RNA表达量,模型组为0.70±0.23,左归丸高剂量组为2.57±0.81,戊酸雌二醇低剂量组为2.20±0.70,戊酸雌二醇高剂量组为2.24±1.03。与模型组相比,左归丸高剂量组及戊酸雌二醇组高、低剂量组ZP1表达量明显上升（P<0.05）,左归丸低剂量组变化无统计学意义（P>0.05）。Dazl m RNA表达量,模型组为0.55±0.11,戊酸雌二醇低剂量组为3.25±0.77。与模型组相比,戊酸雌二醇组低剂量组Dazl表达量明显上升（P<0.05）,左归丸高、低剂量组及戊酸雌二醇高剂量组变化无统计学意义（P>0.05）。各组间ZP3、SYCP3表达量未见统计学差异（P>0.05）。（四）Notch通路相关基因表达qPCR检测提示,左归丸及戊酸雌二醇治疗30天后,相对正常组,Notch1 m RNA表达量,模型组为0.69±0.17,左归丸低剂量组为1.07±0.17,左归丸高剂量组为1.11±0.47,戊酸雌二醇低剂量组为1.31±0.58,戊酸雌二醇高剂量组为1.16±0.39。与正常组相比,模型组Notch1表达量下降,但无统计学意义（P>0.05）。与模型组相比,高、低剂量左归丸及戊酸雌二醇组Notch1表达量上升,但无统计学意义（P>0.05）。Hes1 m RNA表达量,模型组为0.78±0.59,左归丸低剂量组为1.06±0.48,左归丸高剂量组为0.91±0.55,戊酸雌二醇低剂量组为1.43±0.45,戊酸雌二醇高剂量组为0.76±0.08。与正常组相比,模型组Hes1表达量下降,但无统计学意义（P>0.05）。与模型组相比,左归丸高、低剂量组及戊酸雌二醇低剂量组Hes1表达量上升,但无统计学意义（P>0.05）。左归丸及戊酸雌二醇治疗60天后,相对正常组,Notch1 m RNA表达量,模型组为0.79±0.44,左归丸低剂量组为1.42±0.72,左归丸高剂量组为2.79±2.30,戊酸雌二醇低剂量组为1.96±0.74,戊酸雌二醇高剂量组为2.40±0.87。与正常组相比,模型组Notch1表达量下降,但无统计学意义（P>0.05）。与模组组相比,高、低剂量左归丸及戊酸雌二醇组Notch1表达量上升,但无统计学意义（P>0.05）。Hes5 m RNA表达量,模型组为0.37±0.08,左归丸低剂量组为1.42±0.82,左归丸高剂量组为3.74±1.04,戊酸雌二醇低剂量组为1.42±0.85,戊酸雌二醇高剂量组为2.99±1.93。与正常组相比,模型组Hes5表达量下降（P>0.05）,与模组组相比,高、低剂量左归丸及戊酸雌二醇组Hes5表达量上升,但无统计学意义（P>0.05）。\结论:一、临床研究:卵巢功能下降可使抑郁评分上升,是抑郁症的诱发因素。与健康女性相比,卵巢功能下降者伴发焦虑、抑郁概率增高,但不同程度的卵巢功能下降者伴发倾向不同,DOR抑郁倾向明显,POI焦虑倾向明显。以补肾为基本治法的药物治疗,可改善卵巢功能下降者月经情况,延缓抑郁进展,改善焦虑状态。二、实验研究:左归丸及戊酸雌二醇干预均可以改善卵巢功能下降大鼠的精神状态、毛发光泽及活动减少、进食减少等异常情绪表现。补肾填精法可以有效改善化疗源性卵巢功能下降大鼠卵巢储备,可能与促进卵巢生殖干细胞增殖有关。