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肝脏在脂质代谢、消化、吸收、合成和分解过程中均发挥关键作用。在强饲状态下,鹅能将大量脂肪沉积在肝脏中,导致肝脂肪变性,但不损害肝脏的功能。在停止饲喂后,鹅肥肝可以恢复到正常状态。鹅肥肝的研究无论是在医学还是在畜禽分子育种上,均具有重要意义。本试验使用Roche 454 GSFLX测序平台对朗德鹅三个不同填饲状态下的肝脏组织进行测序,对挖掘到的ACAA1基因进行克隆测序分析,结果如下:1.通过转录组测序,共获得3,824,961个原始转录本,其中正常组(NL),填饲组(FL)和恢复组(CL)分别为1,423,917、1,153,743和1,247,301个。包括37,973个isogenes,通过BLASTX对比,发现19,752个(所有序列的52.02%)isogenes与公共数据库匹配良好。2.进一步进行功能注释分析发现:具有GO注释的unigenes有3562个,具有COG注释的有1,196个,注释到KEGG通路的有285个,这些基因主要涉及脂肪酸合成、代谢、结合等途径。3.基于三个文库的差异表达基因比较,鉴定出1,156个差异表达的转录本,主要涉及糖类代谢、脂质合成、代谢、分泌和储存。鉴定了多个与脂肪酸的合成和代谢相关的差异表达基因,从中筛选出6个基因:LPL、ACOX、LIPH、HADHA、ACAA1和FADS。4.通过qRT-PCR检测6个基因的表达水平。结果显示除LIPH基因外,其他基因的定量结果与转录组测序数据一致,这些基因的表达均在填饲组中显著升高而在恢复组中显著下调(P<0.05)。5.利用普通PCR克隆出鹅ACAA1基因的cDNA全长序列,拼接后显示全长序列为 3,352 bp,其中 CDS 区 1,323 bp,3’UTR 77 bp,5’UTR 1,952 bp。6.生物信息学分析发现,朗德鹅ACAA1蛋白分子量为45.0kDa,等电点为9.19。蛋白含有19种氨基酸,其中甘氨酸与丙氨酸含量最高,分别为14.3%和12.7%。7.观察肝脏组织切片发现,填饲状态下,鹅肝沉积大量脂滴。在此期间检测ACAA1基因的表达水平,显示随着填饲时间的延长呈现先上升后下降的趋势,即在填饲14 d表达量最高,随后急速下降。同时发现该基因在填饲组的表达均显著高于对照组(P<0.05)。综上,本试验通过转录组测序筛选出6个与脂肪生成与代谢相关的差异表达基因,并克隆出ACAA 基因的全长序列。此外,发现填饲可以显著促进鹅肝脏中ACAA1基因的表达。这为了鹅的分子育种及后续功能的研究提供理论依据。