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目的 本实验通过建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,考察临床用药壮药白龙抗癌汤剂对Lewis肺癌小鼠体重变化、肿瘤生长抑制及免疫器官的影响,并通过检测Lewis实验小鼠血常规、血清生化指标、血液T淋巴细胞亚群等血液指标,来探讨壮药白龙抗癌汤剂对小鼠Lewis肺癌骨髓抑制、肝肾功能及免疫功能的影响,为研发壮药白龙抗癌汤剂抗肿瘤新药提供科学依据。 方法 1.Lewis肺癌小鼠造模条件的建立:取处于生长对数期的Lewis肺癌细胞,用0.25%胰蛋白酶消化约半分钟,1000rpm离心5分钟,去上清液,加培养基悬浮细胞并调整好浓度接种于C57BL/6小鼠身上,根据肿瘤生长情况,来确定最适合接种的细胞浓度。 2.对Lewis肺癌小鼠饮食的影响:每次给每笼小鼠100g饲料,隔日称一次剩余的饲料重量,计算出每组小鼠平均每日食用的饲料重量。 3.对Lewis肺癌小鼠鼠重的影响:实验前称量小鼠体重,停药后第2天,于取材前,称量各组小鼠的体重,取材后剥离出完整的瘤体,在电子天平上精确称量瘤重,根据公式(实验后鼠重=取瘤前称量的小鼠体重—取瘤后称量的瘤体重量)计算出净鼠重,实验前鼠重为接种前一天小鼠的体重。 4.对Lewis肺癌小鼠肿瘤体积的影响:于接种第7天后,每隔一天用游标卡尺测量小鼠皮下肿瘤最长径(a)和最短径(b)(精确到0.01 mm),计算肿瘤的体积(V=ab2/2),计算各组肿瘤体积平均值。 5.对Lewis肺癌小鼠肿瘤重量的影响及抑瘤率计算:于停药后第二天,脱颈椎处死小鼠,完整剥离肿瘤,对肿瘤精确称重,按公式:抑瘤率=(模型对照组平均肿瘤重量—给药组平均肿瘤重量)/模型对照组平均瘤重量×100%计算。 6.对Lewis肺癌小鼠免疫器官的影响:于停药后第二天,脱颈椎处死小鼠,取各小鼠的脾脏和胸腺称重。按公式计算脾脏指数和胸腺指数:脾脏指数=饵卑脏质量(mg)/体重(g);胸腺指数=胸腺质量(mg)/体重(g)。 7.对Lewis肺癌小鼠的骨髓抑制影响:于停药后第二天,对小鼠眼眶静脉丛取血,进行血常规检测。指标有:白细胞数(WBC),红细胞(RBC),血小板(PLT),血红蛋白(HB)。 8.对Lewis肺癌小鼠的生化指标的影响:停药后第二天自小鼠眼眶静脉丛取血后离心得到血清,测血清生化指标。测定的血清生化指标有ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、Crea(肌酐)、BUN(尿素氮)、NSE(神经元特异性烯醇化酶)。 9.对Lewis肺癌小鼠血液T淋巴细胞亚群的影响:停药后第二天,对小鼠眼眶静脉丛取血,运用流式免疫荧光技术检测小鼠血液中的T淋巴细胞亚群的值。 结果 1.确定Lewis肺癌小鼠模型的适宜细胞浓度为1.0×107个/ml,用量为0.2ml/只。 2.对Lewis肺癌小鼠饮食的影响:与空白组比较,壮药组没有显著性差异,对饮食影响不大。 3.对Lewis肺癌小鼠鼠重的影响:与空白组比较,壮药组体重有所降低(P<0.01),与化药组对比,壮药组体重有所增加(P<0.01)。 4.对Lewis肺癌小鼠肿瘤体积的影响:壮药与化疗药联合使用即综合组肿瘤体积最小,其次是化药组。 5.对Lewis肺癌小鼠肿瘤重量的影响及抑瘤率:与模型组比较,综合组瘤重最小(P<0.01),抑瘤率最高,达到73.61%,壮药组抑瘤率为38.34%,化药组抑瘤率为54.75%。 6.对Lewis肺癌小鼠免疫器官的影响:与化药组比较,综合组、壮药组的脾脏指数有所升高(P<0.05),壮药组的胸腺指数也有升高(P<0.05)。 7.对Lewis肺癌小鼠的骨髓抑制影响:与化药组比较,壮药组白细胞数有所增加(P<0.05),反映壮药组能减轻骨髓抑制作用。 8.对Lewis肺癌小鼠的生化指标的影响:与化药组比较,壮药组ALT有所降低(P<0.05)。与化药组比较,壮药组AST有降低(P<0.01)。与模型组比较,综合组、壮药组NSE有所降低(P<0.01)。与化药组比较,综合组NSE值有所降低(P<0.05)、壮药组NSE有所降低(P<0.01)。 9.对Lewis肺癌小鼠血液T淋巴细胞亚群的影响:与空白组比较,CD4+/CD8+(%)模型组、化药组、综合组均有降低(P<0.01);与模型组比较,化药组有所降低(P<0.01),壮药组有所升高(P<0.05),与化药组比较,综合组、壮药组有所升高(P<0.01)。 结论 1.壮药组单用对肿瘤有一定的抑制作用,壮药组与化疗药顺铂联用能显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长。 2.壮药组能使胸腺指数升高,在一定程度上减缓患肿瘤小鼠的免疫力下降。 3.壮药组能升高Lewis肺癌小鼠的白细胞数,减少肺癌小鼠的骨髓抑制作用;降低谷丙转氨酶、谷草转氨酶,减轻肺癌小鼠的肝脏功能损害,对T淋巴细胞亚群的免疫功能没有影响。提示在治疗Lewis肺癌小鼠肿瘤实验中,壮药组较化药组比,有明显的减毒效果。