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目的:用荧光定量PCR及超微病理技术观察MEBT/MEBO对大鼠慢性难愈合创面的干预作用,研究其促进溃疡创面愈合的机制。 方法:将80只雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、湿润烧伤膏组、康复新液组,每组20只。大鼠常规饲养1周后,各组建立全层皮肤缺损开放性创面模型。空白对照组建立开放性创面模型后不做处理,按常规饲养。其余三组在开放性创面模型的基础上肌注醋酸氢化可的松,制成难愈性创面模型。模型组按创面大小外敷单层生理盐水纱布;湿润烧伤膏组以药膏直接涂布于创面上;康复新液组创面外喷外敷康复新液,此三组均在上药后的创面上加盖两层消毒干纱布,用胶布“丰”字形固定,每日定时换药2次,连续12天。在用药后第12天,观察各组大鼠创面愈合程度情况,用图像分析软件分析计算出各组创面愈合率。在用药后第3、6、12天,将所有大鼠在麻醉情况下,取相同部位,切取大小为1mm×1mm×1mm的创面组织制作成超微病理切片观察大鼠皮肤创面细胞内细胞器的形态结构。在用药后第12天,将所有大鼠在麻醉情况下,取相同部位的皮肤组织,使用荧光定量PCR技术对MAPKK、c-myc mRNA进行相对定量分析,测定其表达量。 结果:(1)用药第12天创面愈合率比较:空白对照组平均愈合率为96.75±3.12％;模型组平均愈合率为74.39±2.23％;湿润烧伤膏组平均愈合率为85.41±1.16％;康复新液组平均愈合率为81.38±2.42％。湿润烧伤膏组与模型组相比:F=241.246,P<0.05,差异有统计学意义;湿润烧伤膏组与康复新液组相比F=0.283,P>0.05,差异无统计学意义。(2)细胞超微病理结构的比较:用药第3天,模型组、湿润烧伤膏组、康复新液组三组创面均有不同程度的改变,但主要体现在细胞核形态改变,明显发育异常。用药第6天,模型组细胞核依旧破坏严重,线粒体异常;湿润烧伤膏组与康复新液组的显示细胞结构有明显的改善,内质网、高尔基体、线粒体等形态结构完整,但康复新液组部分细胞仍有异常情况存在。用药第12天,模型组细胞核仍不完整,但可观察到少量线粒体及内质网;湿润烧伤膏组的细胞结构发育良好,基本恢复至正常水平;康复新液组细胞结构恢复亦良好,但恢复程度不及湿润烧伤膏组。(3)与模型组相比,湿润烧伤膏组MAPKK mRNA表达量增高,F=177.410,P<0.05;c-myc mRNA表达量增高,F=208.163,P<0.05,差异有统计学意义;与康复新液组相比,湿润烧伤膏组MAPKK mRNA表达量的F=0.148,P>0.05,c-myc mRNA表达量的F=0.126,P>0.05,差异无统计学意义。 结论:MEBT/MEBO能够有效地提高大鼠皮肤慢性溃疡愈合率,促进慢性难愈合创面的愈合;改善细胞超微病理结构,使细胞核、内质网、高尔基体、线粒体、核糖体等细胞器从损伤状态恢复至正常生理功能水平;提高MAPKK、c-myc mRNA的表达量,修复损伤创面,促进肉芽组织形成,加快创面愈合。本研究结果表明 MEBT/MEBO在治疗慢性难愈合创面方面具有一定的疗效。