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背景急性脑梗死（acute cerebral infarction,ACI）具有发病率、致残率、复发率、死亡率均高“四高”的特点,它所带来的躯体伤害及精神伤害严重影响着人们的日常生活,而大脑中动脉闭塞（Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO）是 ACI 常见类型之一,ACI后即使及时进行治疗也会因再灌注而带来较为严重的脑结构损伤以及功能障碍即脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI）,安全有效抑制 CIRI 的发生已然成为科学界亟需解决的重要问题之一。王永炎院士通过总结古今历代医家对中风病机的认识和经验后,率先提出了“毒损脑络”病机学说,从此展开了新的对中风认识的思路,并据此提出了活血解毒通络的治疗大法。临床常用其代表药物苦碟子注射液进行治疗以改善患者神经功能、提高生命质量,但其对缺血后脑组织病理学不同时间点的影响、何时影响最大、其发挥作用是否与EphrinA5信号通路被调节有关尚不清晰。因此本研究拟探讨苦碟子注射液预处理对急性脑缺血再灌注血瘀毒损证病理学变化的影响及与EphrinA5信号转导通路的相关性。目的建立再灌注不同时间点的急性脑缺血再灌注血瘀毒损证大鼠模型,使用苦碟子注射液对实验动物进行干预,观察其对模型大鼠的神经功能缺损的影响,并通过透射电镜观察苦碟子注射液对大鼠患侧脑皮质区和海马区神经元不同时间点的病理学结构变化的影响,通过采用免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）、免疫蛋白印迹法（Western blotting,WB）和实时荧光定量 PCR 法（Quantitative Real-time PCR,qPCR）观察并检测实验大鼠皮质区、海马区EphrinA5的分布及表达水平,从病理学、蛋白和基因的水平依次进行探讨苦碟子注射液对急性脑缺血再灌注血瘀毒损证大鼠的保护作用机制。方法1.选择Wistar健康雄性大鼠208只,随机分为假手术组、模型组和治疗组三组,再将模型组和治疗组分为1h、3h、6h、24h、72h、7d六个亚组,每组16只;2.参考Longa改良法对Wistar大鼠进行急性脑缺血再灌注血瘀毒损证模型的制备,利用苦碟子注射液8.4/kg/d-1进行腹腔注射;3.使用 Zea Longa评分法对实验大鼠进行神经功能缺损评分,观察实验大鼠的行为学变化以及用药干预后的变化;4.透射电子显微镜下观察实验大鼠皮质区和海马区的脑神经元病理结构的改变以及用药干预后的变化;5.采用免疫组化法及WB法观察实验大鼠皮质区和海马区的EphrinA5蛋白的分布及表达情况以及用药干预后的变化;6.采用qPCR法检测实验大鼠皮质区和海马区的EphrinA5 mRNA的表达情况以及用药干预后的变化;结果1造模后急性脑缺血再灌注血瘀毒损证模型大鼠都出现了不同程度的神经功能缺损,利用苦碟子注射液干预的实验大鼠的Zea Longa评分于术后24h、72h、7d较同期模型组明显下降（P＜0.05）;2.造模后透射电子显微镜下模型组各时间点实验大鼠皮质区和海马区均出现了不同程度的神经元超微结构损伤,可见细胞结构不清晰、细胞器数量减少、异染色质增加;神经元超微结构的改变程度与时间呈正比;经苦碟子注射液干预的实验大鼠的神经元超微结构得以改善,以6h、72h最为显著;.3.EphrinA5、EphB2蛋白主要分布在神经元细胞胞浆中和轴索上;与假手术组相比,各个时间点的模型组和治疗组实验大鼠皮质区和海马区的EphrinA5蛋白的表达均明显增多（P＜0.05）,模型组实验大鼠皮质区EphB2蛋白表达于6h、24h、72h、7d明显增多（P＜0.05）,治疗组实验大鼠海马区EphB2蛋白表达于每个时间点均明显增多（P＜0.05）;与模型组相比,经苦碟子注射液干预的实验大鼠皮质区EphrinA5蛋白表达于术后6h开始明显减少（P＜0.05）,EphB2蛋白表达于术后3h开始明显减少（P＜0.05）,海马区EphrinA5蛋白表达于再灌注后3h开始明显减少（P＜0.05）,EphB2蛋白表达于再灌注后6h开始明显减少（P＜0.05）;4.与假手术组比较,模型组大鼠皮质区EphrinA5 mRNA于术后3h、6h、24h、72h、7d高度表达,海马区EphrinA5 mRNA于术后1h、6h、24h、72h、7d高度表达（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,苦碟子注射液能够降低实验大鼠皮质区和海马区EphrinA5 mRNA的表达水平,存在统计学差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论1.苦碟子注射液可以使急性脑缺血再灌注血瘀毒损证大鼠的神经功能缺损症状得以改善,脑组织神经元的形态学病理改变得以减轻,起到一定的脑保护作用;2.急性脑缺血再灌注后患侧皮质区和海马区的EphrinA5信号转导通路被激活，EphrinA5、EphB2蛋白主要分布在神经元细胞胞浆中与轴索上,缺血皮质区和海马区EphrinA5、EphB2蛋白的表达明显上调;3.苦碟子注射液保护脑组织可能与调节EphrinA5信号转导通路有关,可降低其表达和活性,从而抑制脑缺血再灌注损伤,也证实了 EphrinA5信号转导通路的传递与“血瘀毒损”具有一定的关联性,从分子生物学角度为活血解毒通络法代表药物苦碟子注射液保护脑组织提供了依据。