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目的:膀胱出口梗阻是儿童泌尿系统最常见的下尿路梗阻疾病,儿童先天性膀胱出口梗阻多继发于尿道异常,最常见的病因是后尿道瓣膜。目前该疾病的治疗方法不能从根本上改善患儿膀胱功能及远期终末期肾病的结局,仍会影响患儿生活质量甚至是生命健康。因此,明确先天性膀胱出口梗阻后膀胱病理改变的时序性,寻找治疗该疾病的有效手段,并选择一个合适的节点进行干预,对该疾病所致膀胱损伤的修复有重要意义。随着干细胞研究的深入,去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞有可能能够改善先天性膀胱出口梗阻导致的膀胱损伤,为先天性膀胱出口梗阻开辟一个新的治疗方向。因此,本研究旨在明确新生大鼠部分膀胱出口梗阻(partial bladder outlet obstruction,PBOO)后膀胱病理改变,并探讨“滤网法”培养的DFAT细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的能力。研究方法:1.新生SD大鼠45只随机分为PBOO组30只和对照组15只,PBOO组以术后2d、4d、6d、8d、10d分为5组,每组6只,对照组以假手术后2d、4d、6d、8d、10d分为5组,每组3只。通过HE染色观察膀胱组织形态,组织免疫荧光检测钙调节蛋白-1(calponin 1)、波形蛋白(vimentin)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SMMHC)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)表达量,观察PBOO后膀胱病理改变。2.“滤网法”体外分离培养大鼠DFAT细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态、生长情况,通过细胞流式分析表面抗原表型鉴定细胞并检测细胞纯度,体外成平滑肌细胞诱导后,通过细胞免疫荧光检测αSMA表达。结果:1.新生大鼠PBOO后肉眼观膀胱壁增厚,膀胱组织代偿性增生,随着梗阻时间延长,膀胱体积增加,膀胱壁逐渐变薄。HE染色可见PBOO后2天炎细胞浸润,4天肌细胞排列紊乱,黏膜下层和肌层增厚,肌间隙增大。组织免疫荧光检测PBOO后膀胱组织中calponin 1、vimentin、SMMHC和collagenⅢ表达量呈现先增加后减少的趋势,且PBOO后4天calponin 1、vimentin和SMMHC表达量最高,PBOO后8天collagenⅢ表达量最高。2.“滤网法”培养的DFAT细胞呈成纤维样、梭形、峰谷样排列。DFAT细胞流式分析表面抗原标志物表达为CD29+CD90+CD31-CD45-,阳性细胞百分数分别为CD29+(96.93±3.61)%,CD90+(98.65±0.84)%,CD31+(0.16±0.13)%,CD45+(0.16±0.10)%。DFAT细胞经体外成平滑肌细胞诱导后,αSMA染色阳性,αSMA阳性细胞率为(73.56±8.44)%。结论:1.PBOO可引起膀胱损伤,新生大鼠PBOO后2天膀胱组织发生平滑肌增生、上皮-间质转化和胶原沉积,PBOO后4天膀胱组织平滑肌增生、上皮间质-转化最显著,PBOO后8天膀胱组织胶原沉积最显著。2.“滤网法”培养的大鼠DFAT细胞可以经体外诱导分化为平滑肌细胞,为其应用于膀胱组织工程提供了可能。