【摘 要】
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目的:(1)建立黄连藤质量标准;(2)选择黄连藤生物碱的最佳提取纯化工艺;(3)明确黄连藤醇提物(AE)的急性毒性及药理作用。 方法:(1)采用性状、显微、理化、薄层鉴别对黄连藤
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目的:(1)建立黄连藤质量标准;(2)选择黄连藤生物碱的最佳提取纯化工艺;(3)明确黄连藤醇提物(AE)的急性毒性及药理作用。 方法:(1)采用性状、显微、理化、薄层鉴别对黄连藤进行生药学研究,为药材质量标准建立提供一定依据;(2)采用酸性染料比色法和盐酸甲醇比色法对黄连藤总生物碱含量进行测定;(3)采用HPLC测定黄连藤中盐酸小檗碱含量;(4)单因素实验联合正交实验法优化黄连藤总生物碱提取工艺;(5)采用001×7型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂富集AE总生物碱,确定纯化工艺;(6)通过测定MDT研究AE的急性毒性。(7)应用二甲苯诱发的小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱发的大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿模型研究AE的抗炎作用;(8)通过小鼠热板实验、醋酸扭体实验研究AE的镇痛作用;(9)采用大鼠酵母发热实验评价AE的解热作用;(10)通过氨水引咳实验和气管酚红排泌实验研究AE的止咳祛痰作用;(11)通过研究AE对番泻叶致泄小鼠和正常小鼠肠功能的影响评价其止泻作用;(12)采用烟熏法制备慢性支气管炎的大鼠模型,HE染色观察AE给药组大鼠支气管的病理组织改变,生化法检测各组大鼠肺组织和血清中SOD的活性以及MDA的含量变化,来评价AE对慢性支气管炎大鼠的治疗作用;(13)采用乙酸灌肠法制备结肠炎(UC)大鼠模型,观察AE对大鼠的一般情况及组织形态学影响。 结果:(1)提出了黄连藤药材性状和显微、理化、薄层鉴别特征;(2)酸性染料比色法测定黄连藤总生物碱含量为2.13%,盐酸甲醇比色法测定黄连藤总生物碱含量为1.62%;(3) HPLC测定黄连藤盐酸小檗碱含量为0.98%,盐酸小檗碱含量在0.075~0.375μg范围内线性关系良好,r值为0.9999,平均加样回收率为98.7%;(4)黄连藤总碱最佳提取条件为:70℃下,70%的乙醇,料液比1∶10,提取3次,每次1h;(5)阳离子交换树脂对AE纯化的最佳工艺为:12倍量1%盐酸浸渍24h,过滤,所得溶液加纯化水调整浓度为5.817mg·ml-1,调孳pH3.0,以1ml·min-1的流速上样,上样饱和后用纯化水冲洗至流出液与10%硅钨酸试剂呈阴性反应为止,之后以30BV80%乙醇-10%氨水溶液洗脱。纯化后总生物碱含量可达50%以上;(6)小鼠对黄连藤的MDT为408g· kg-1,相当于50kg体重人临床使用计量的1360倍;(7)AE可以抑制小鼠耳肿,能明显抑制大鼠足肿和肉芽肿;(8)AE可以显著提高小鼠痛阈并减少小鼠扭体次数;(9)AE对发热大鼠的解热作用显著;(10) AE能明显延长引起半数小鼠咳嗽的氨水刺激时间,并明显增加小鼠气管酚红排泌量;(11) AE可以显著减轻番泻叶引起的小鼠腹泻,并对正常小鼠的肠功能推进有显著抑制作用;(12) AE可以明显改善给药组大鼠的肺部病理组织变化,减轻支气管粘膜上皮脱落和炎细胞浸润等症状。使大鼠肺及血清中的SOD含量明显降低,MDA含量明显升高;(13)高剂量AE能显著改善乙酸诱导的大鼠UC症状,明显减轻结肠黏膜组织形态学损伤 结论:(1)建立了黄连藤生药材的显微、理化及TLC鉴别方法;(2)建立了UV法测定黄连藤中总生物碱和HPLC法测定黄连藤中盐酸小檗碱含量的方法,两种方法稳定性和重现性较好,可用于黄连藤药材的质量控制;(3)优选出AE总生物碱的提取纯化工艺,经纯化后总生物碱含量高于50%,可达到纯化目的;(4)黄连藤有显著的抗炎、镇痛、解热、祛痰、止泻作用,在临床使用剂量范围是非常安全的;(5)AE对实验性慢性支气管炎大鼠具有治疗作用,可通过清除自由基,提高机体抗氧化损伤能力而减轻气道炎症反应;(6)高剂量AE可以改善乙酸诱导的大鼠UC症状。
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