论文部分内容阅读
猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumoniae，PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的一种以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的接触性传染病。本研究对胸膜肺炎放线杆菌三种Apx毒素进行了提纯及生物学活性与理化特性的鉴定，并进行了三种毒素对小鼠免疫保护力的研究。研究根据APP10型菌只分泌ApxⅠ，APP7型菌只分泌ApxⅡ和APP3只分泌ApxⅢ的特点，分别对APP10、APP7和APP3菌株进行培养，收集上清，通过初提及凝胶过滤层析获得了较高纯度的ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ三种毒素，并通过SDS-PAGE进行分子量的鉴定，三种毒素的分子量分别为105kD，103kD和120kD。同时，对提取的三种毒素进行生物学活性、理化特性的鉴定。生物学活性试验表明，ApxⅠ具有较强的溶血活性和细胞毒性，ApxⅡ具有中度的溶血活性和较弱的细胞毒性，ApxⅢ具有强的细胞毒性，而无溶血活性。理化特性试验表明，毒素ApxⅠ和ApxⅡ经60℃30min及100℃10min的加热处理后仍有溶血活性，毒素ApxⅢ经60℃30min及100℃10min的加热处理后仍有细胞毒性；三种毒素都能够耐受5‰甲醛1h和1mg／ml蛋白酶K的处理，但活性明显降低；酸碱度敏感试验中，三种毒素在pH6～8范围内具有最高的生物学活性。对三种毒素的反应原性及免疫保护作用进行了研究。用纯化的ApxⅠ，ApxⅡ和ApxⅢ三种毒素，分别与异型血清做交叉中和试验和琼扩试验检测其反应原性。在交叉中和试验中，ApxⅠ抗原与APP血清型1，5血清；ApxⅡ抗原与APP血清型1，4，5血清；ApxⅢ抗原与APP血清型6，8血清分别出现交叉反应；在琼扩试验中，ApxⅠ抗原与1，5，9型的血清有交叉反应；ApxⅡ抗原与1，4，5，9型的血清有交叉反应；ApxⅢ抗原与4，6，8型血清有交叉反应。结果表明Apx毒素抗原可与多个血清型发生交叉反应。将ApxⅠ，ApxⅡ和ApxⅢ三种毒素灭活后作为抗原经弗氏完全佐剂乳化后免疫小鼠，两周免疫一次，共三次。每次免疫两周后将小鼠断尾采血，用本室建立的ELISA方法检测毒素抗体水平；第三次免疫两周后，进行同源菌株攻毒分别有80％(8／10)，70％(7／10)和80％(8／10)的保护效果。