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目的:主要研究维药刺糖多糖(polysaccharide from Saccharum Alhagi,SAP)对小鼠体内及体外免疫活性,并初步探讨其免疫活性作用机制。方法:(1)采用水提醇沉法从刺糖中提取多糖SAP,并制备了50%醇沉刺糖多糖SAP-1和80%醇沉刺糖多糖SAP-2。(2)建立腹腔注射环磷酰胺免疫抑制小鼠动物模型,小鼠灌胃给SAP,利用碳粒廓清实验测定非特异性免疫功能;血清溶血素实验反映抗体生成水平;测定血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10、IL-6的生成水平来评价SAP的免疫活性。(3)从小鼠体内提取脾淋巴细胞,分别用SAP-1和SAP-2干预处理,采用CCK-8法考察药物对脾淋巴细胞的增殖活性,并用ELISA法检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-12的浓度。(4)经SAP-1和SAP-2干预的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用MTT法考察其增殖活性,采用中性红实验考察吞噬功能,分别利用Griess试剂盒和ELISA试剂盒检测NO的生成水平和细胞因子IL-2、TNF-α、IL-1β的浓度。(5)采用实时荧光定量PCR法检测SAP-1和SAP-2对小鼠脾淋巴细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7中相关基因表达调控的影响。(6)通过SAP-1和SAP-2对羟自由基和超氧阴离子的清除能力,考察其抗氧化活性。结果:(1)通过测定SAP对免疫抑制小鼠中的碳粒廓清率和血清溶血素水平。结果表明,高浓度的SAP能使免疫抑制小鼠的吞噬功能和抗体生成水平恢复正常,并能够提升免疫抑制小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-6的含量。(2)根据CCK-8法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果表明,SAP-1和SAP-2在高浓度时,对小鼠体外脾淋巴细胞有增殖作用,能够增强由脾淋巴细胞分泌的细胞因子IL-12、IL-6和IL-10。(3)通过MTT法测定RAW264.7的增殖活性。结果表明,高浓度的SAP-1和SAP-2对巨噬细胞RAW264.7的增殖和细胞因子IL-2、TNF-α、IL-1β均有促进作用,还可增强巨噬细胞RAW264.7的吞噬功能和NO的生成水平。(4)实时荧光定量法的测定结果表明,SAP-1和SAP-2能上调脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7中IL-6、TNF-α、NF-κB、IL-1β、iNOS的基因表达调控水平。(5)通过对羟基自由基和超氧阴离子清除率的测定结果表明,SAP-1和SAP-2浓度为15 mg·mL-1时对羟自由基的清除能力与对照品相同,而对超氧阴离子的清除能力较弱。结论:(1)刺糖多糖SAP能增强疫抑制小鼠的体内免疫功能。(2)SAP-1和SAP-2均能够促进脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW264.7的增殖及细胞免疫活性,且SAP-1作用较强。(3)通过对基因表达调控的考察推测,SAP-1和SAP-2可能通过NF-κB的信号传导来调控免疫因子相关基因表达水平。(4)SAP-1和SAP-2有着一定的抗氧化活性。(5)刺糖多糖具有良好的免疫活性,特别是分子量较大的SAP-1。