【摘 要】
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雄激素脱发是临床上最常见的脱发类型,发病率高,且呈年轻化趋势,给人们的生活带来极大不便以及精神压力、心理负担。米诺地尔和非那雄胺是临床治疗雄激素脱发的主要用药。但是药物的使用存在瘙痒、刺激性皮炎、性功能障碍等副作用。植物及中药提取物有丰富的活性成分以及药理作用,不同途径以及多靶点作用抗雄激素,促进毛发生长,作为药物替代疗法具有应用价值。茶籽榨油后的固体残渣称为茶麸,也称茶粕、茶籽饼、茶枯饼,是茶籽
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雄激素脱发是临床上最常见的脱发类型,发病率高,且呈年轻化趋势,给人们的生活带来极大不便以及精神压力、心理负担。米诺地尔和非那雄胺是临床治疗雄激素脱发的主要用药。但是药物的使用存在瘙痒、刺激性皮炎、性功能障碍等副作用。植物及中药提取物有丰富的活性成分以及药理作用,不同途径以及多靶点作用抗雄激素,促进毛发生长,作为药物替代疗法具有应用价值。茶籽榨油后的固体残渣称为茶麸,也称茶粕、茶籽饼、茶枯饼,是茶籽油生产过程中的农业副产物。除粗纤维外,茶麸中含有多种生物活性物质,茶皂素、蛋白质、多糖以及黄酮等,在医药、食品、日化等领域显示出广泛应用价值。本文以茶麸为原料,主要研究内容与结论如下:1.采用超声辅助纤维素酶酶解提物茶麸中的总黄酮,通过单因素实验筛选和正交试验结果,得到较优的提取工艺为50℃下,调节pH=6,50%体积分数的乙醇,添加2.5%酶提取1 h,在此条件得率为(10.13±0.32)mg/g。2.研究茶麸醇提物对真皮乳头细胞的影响及其作用机制。细胞活力测试表明茶麸醇提物对真皮乳头细胞的增殖具有促进作用,并且在20μg/mL细胞增殖率最高。流式检测细胞周期以及凋亡结果表明20μg/mL茶麸醇提物抑制细胞的早凋,减少G0/G1期细胞数量,促进静止态的G1期细胞向S和G1期过渡,茶麸醇提物可以刺激真皮乳头细胞的有丝分裂,具有促进细胞增殖的能力。茶麸醇提物发挥与米诺地尔相同的作用,激活钾离子通道,促进细胞增殖。Western blot结果表明茶麸醇提物以剂量依赖性方式增加ERK和AKT的磷酸化表达。PCR结果显示与对照组相比,20μg/ml茶麸醇提物处理上调HGF、VEGF、IGF-Ⅰ的表达,下调真皮乳头细胞中TGF-β1的表达。与阳性对照相比,20μg/mL茶麸醇提物显著增加了HGF以及ALP的表达。3.建立小鼠生发模型,考察茶麸醇提物对毛发生长的影响。结果显示茶麸醇提物组新生毛发的毛囊延伸至皮下深层组织,且毛球明显染成黑色,表明毛囊处于生长期。阳性对照组和茶麸醇提物组小鼠相较阴性对照组小鼠而言毳毛数量明显增多,终毛/毳毛比值增大。进一步分析了小鼠血清和皮肤组织中的VEGF含量,结果表明茶麸醇提物组小鼠血清和皮肤组织中VEGF的含量均增加。表明茶麸醇提物对毛囊形成与再生没有作用可能是通过影响小鼠体内毛发生长相关因子,促进毳毛向终毛转变,维持和延长毛囊生长期从而促进头发的生长。4.研究茶麸醇提物抗雄激素的作用。基于细胞活力,以及二氢睾酮对真皮乳头细胞炎症因子IL-6以及IL-1α的生成量为指标,建立200 ng/mL的二氢睾酮作为刺激物诱导真皮乳头细胞炎症模型。二氢睾酮诱导真皮乳头细胞产生炎症、凋亡以及衰老,茶麸醇提物以梯度依赖性降低二氢睾酮共孵育细胞分泌的IL-6含量。10、20μg/mL茶麸醇提物对IL-1α的分泌具有显著抑制效果。PCR结果显示二氢睾酮孵育细胞的SRD5A2、AR、IL-6、p53、Bax表达量均显著上升,Bcl-2表达量降低。不同浓度茶麸醇提物与二氢睾酮共同处理真皮乳头细胞后,AR和SRD5A2表达量大幅降低。对IL-6、p53、Bax表达呈现抑制作用。表明二氢睾酮作用真皮乳头细胞后SRD5A2表达提高,激活雄激素受体,促进真皮乳头细胞凋亡因子表达,茶麸醇提物在一定浓度抑制SRD5A2、AR、p53、Bax、IL-6的表达。β-半乳糖苷酶结果显示5、10、20μg/mL茶麸醇提物处理组细胞衰老数目减少。5.从雄性SD大鼠附睾中提取Ⅱ型5α-还原酶,确定了0.8 mg/mL的T,1.5 mg/mL的NADPH以及1.5 mL的Ⅱ型5α-还原酶粗提取物,在37℃下反应1 h的最佳酶促反应条件。在此条件下,不同浓度茶麸醇提物对Ⅱ型5α-还原酶活的抑制作用随浓度升高而升高,其对Ⅱ型5α-还原酶的半抑制浓度IC50为3.80 mg/mL。
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