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目的:通过观察骨髓间充质干细胞(MSC)对肝星状细胞(HSC)细胞周期及调控蛋白表达的影响,进一步探讨MSC对HSC增殖抑制作用的机制。方法:MSC的分离:在无菌条件下分离SD雄性大鼠股骨骨髓,采用贴壁培养法进行MSC培养、纯化和扩增,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)和纤维原细胞系冻融后传代使用。应用6孔塑料细胞培养盒,在半透膜(transwell insert)上接种MSC (2×105cells/ well),在6孔塑料培养板上接种HSC-T6细胞(2×105cells/ well) ,建立上下双层细胞共培养体系,常规培养;实验分3组:①实验组在半透膜上接种大鼠骨髓间充质干细胞,在6孔塑料培养板上接种肝星状细胞,建立上下双层细胞共培养体系;②对照组将大鼠骨髓间充质干细胞更换为成纤维细胞;③空白组仅行肝星状细胞单独培养。以上体系培养观察72 h。每天于倒置相差显微镜下动态观察活体细胞形态学改变;WST-8法检测肝星状细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测肝星状细胞CyclinD1和P27 mRNA的表达,Western blot检测肝星状细胞CyclinD1和P27蛋白的表达。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析。结果:与对照组比较,实验组共培养24 h,48 h,72 h肝星状细胞生长抑制率显著升高(P <0.01);共培养72h G0/G1期细胞显著增加(P <0.01),S期细胞显著减少(P <0.01),骨髓间充质干细胞可阻滞肝星状细胞由G0/G1期向S期转换。共培养24 h,实验组CyclinD1 mRNA及蛋白表达开始下调,至72 h时表达量显著低于对照组、空白组(P <0.01);共培养全过程中各组P27 mRNA的表达无明显差异(P >0.05),共培养24 h时实验组P27蛋白表达较对照组、空白组均显著上调(P <0.01)。结果证实大鼠骨髓间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖。结论:(1)骨髓间充质干细胞可在体外抑制肝星状细胞的增殖。(2)骨髓间充质干细胞抑制肝星状细胞增殖的机制可能是通过抑制CyclinD1,上调P27蛋白的表达,使细胞周期停滞于G0 /G1期,从而发挥抑制大鼠肝星状细胞增殖的作用。