黑果小檗总花色苷的制备及其对AD模型大鼠认知功能障碍的影响

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dengliguo1971
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目的:本研究以黑果小檗总花色苷(BTA)为研究对象,优选BTA的最佳提取及纯化工艺,考察BTA的急性毒性,旨左初步探讨BTA对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能障碍的影响及其可能机制。方法:1.利用酶-超声辅助提取法,以BTA提取率为评价指标,采用单因素及正交实验确定较优提取工艺。2.利用大孔树脂吸附法,以BTA的吸附率与解析率为评价指标,采用单因素及正交实验确定较优纯化工艺。3.采用机率单位法进行急性毒性实验,测定SPF级昆明小鼠对BTA的LD50。4.建立Aβ25-35诱导的AD大鼠模型,选用多奈哌齐作为阳性药(剂量0.8mg/kg),给予BTA高剂量(218.6 mg/kg)、BTA中剂量(109.3 mg/kg)、BTA低(54.6 mg/kg)进行给药干预;对各组大鼠大脑质量变化情况分析;Morris水迷宫实验考察各组的大鼠认知功能与学习记忆能力;HE染色法观察各组大鼠海马CAI区病理学改变;电镜下观察各组大鼠海马CAI区自噬体产生差异;免疫组织化学检测各组大鼠海马Aβ25-35、Beclin-1、LC3B蛋白的表达情况;Westernblot法测定各组大鼠海马PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、LC3B、Beclin-1蛋白的表达情况。结果:1.果胶酶酶解液pH值为4,酶解温度50℃,酶解时间30min,酶用量1.5%,在此条件下BTA的提取率最高,为1.45%。2.BTA上样液质量浓度为0.2339mg/mL,上样流速为2mL/min,上样液pH值为1.0,洗脱液乙醇浓度为50%,洗脱液pH值为1.0,洗脱流速为2mL/min。树脂最大上样量为12.34mg/g,洗脱时需要pH1.0的50%乙醇至少6个柱体积,纯化后总花色苷的含量为39.28%,色价为:330。3.急毒实验显示,BTA对昆明小鼠的急性经口LD50为10.929g/kg,其95%置信区间为9.679~12.431g/kg。4.大鼠大脑的脏器系数显示:与模型组相比,BTA和多奈哌齐组可明显增高大鼠的大脑质量;水迷宫实验表明:与模型组相比,BTA和多奈哌齐组可明显缩短逃避潜伏期,可明显增加穿越平台次数;免疫组织化学和Westernblot实验表明:与模型组相比,BTA和多奈哌齐组可显著升高AD大鼠海马PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平,显著降低Aβ25-35、LC3B、Beclin-1蛋白表达水平。结论:1.采用酶-超声辅助提取法及大孔吸附树脂法用于提取纯化BTA,工艺稳定可行。2.BTA对昆明小鼠的急性经口LD50为10.929g/kg,为后续药理实验研究及临床安全用药提供实验参考。3.BTA可有效改善AD模型大鼠的认知功能障碍,其保护作用可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR通路而抑制自噬有关。
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