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目的本研究对不同剂量的甜茶素、壳寡糖及二者联用对糖尿病小鼠的作用进行深入研究,并对其改善糖尿病的效果进行比较,并探讨其机制,为协助治疗糖尿病的临床应用提供理论依据;本研究对四种从甜茶中提取甜茶素的方法进行比较,以浸提率为参考标准,探究最优提取方法和条件。方法1甜茶素、壳寡糖及二者联合对糖尿病小鼠的作用研究购入310只成年雄性昆明小鼠,适应性饲养5天后,随机选择13只小鼠作为空白对照组,其余均腹腔注射链脲菌素进行造模。根据随机数字表法,根据体重和空腹血糖值将糖尿病模型小鼠分为11组,即:甜茶素高、中、低剂量组、壳寡糖高、中、低剂量组、联合作用高、中、低剂量组、标准对照组(二甲双胍)、模型对照组(生理盐水),按一定剂量对所有小鼠进行连续12周的灌胃操作,记录体重、饮水量和基本状况等。干预后测定空腹血糖(FBG)和口服糖耐量(OGTT)。摘下眼球并取血后,取出小鼠胰腺、肾脏、肝脏等器官,用10%甲醛溶液固定,包埋在石蜡中制成病理切片,观察。测定全血血红蛋白(HbA1c),血清胰岛素(INS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)、肌酐(Cre)、血尿素氮(BUN)、肝糖原(HG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等指标。2甜茶素的提取方法和条件优化以水作为提取溶剂,采用超声提取法、回流提取法、酶法和微波消解法提取甜茶素,通过L934正交试验探索其最佳提取条件,对超声提取法探索提取时间、提取温度和固液比,对回流浸提法探究提取时间、固液比和提取次数,对酶法探索酶量对浸提率的关系,对微波浸提法探究浸提液pH、微波消解仪功率和浸提时间。用高效液相色谱法检测甜茶素的含量,并绘制标准曲线,以浸提率为参考指标,探究最优提取方法和条件。结果1甜茶素、壳寡糖及二者联合对糖尿病小鼠的作用研究。1.1糖尿病小鼠明显表现出“三多一少”的特征。模型对照组和各剂量组小鼠体重均低于空白对照组,各干预剂量组小鼠体重略高于模型对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。1.2与模型对照组相比,甜茶素组和联合作用组均能降低FBG、HbA1c和口服糖耐量水平,壳寡糖和联合作用高、中剂量组能降低小鼠TC、TG和LDL-c水平,升高HDL-c水平(P<0.05);甜茶素高剂量组、联合作用高、中剂量组HG浓度显著升高,壳寡糖、联合作用高剂量组AST、AST水平显著降低(P<0.05);除此之外,甜茶素高剂量也能降低LDL-c和AST水平,壳寡糖高、中剂量组能降低口服糖耐量水平(P<0.05)。血清Cre、BUN水平各干预组未见异常。1.3联合作用各剂量组与单独作用各剂量组相比较,高剂量联合作用组TG、ALI水平明显低于高剂量甜茶素组,FBG、HbA1c、OGTT曲线下面积明显低于壳寡糖高剂量组(P<0.05),其余指标并无差异(P>0.05);联合作用中剂量组HbA1c、OGTT曲线下面积低于壳寡糖中剂量组,TC和LDL-c水平高于壳寡糖中剂量组(P<0.05),其余指标无显著差异(P>0.05);联合作用低剂量组HbA1c水平高于甜茶素低剂量组,TC、LDL-c显著高于低剂量甜茶素组,HbA1c、OGTT曲线下面积显著低于低剂量壳寡糖组(P<0.05),其余指标无显著差异(P>0.05)。1.4病理检测结果。肝脏组织病理学显示,各干预组与模型组相比肝索结构清晰,肝细胞排列较为规则,损伤得到缓解,脂肪变性细胞减少,空泡样细胞极少甚至消失。肾脏组织病理学显示,各干预组与模型组相比肾小球结构完整,体积增大程度低,肾间质有少量中性粒细胞浸润,管状上皮细胞水肿情况有所改善,管腔开放,少见或未见细胞变性。胰腺组织病理显示,各干预组胰岛受损伤程度较轻,胰岛形状更规则、面积更大、细胞数量更多,炎细胞浸润程度低,少见或未见细胞空泡样变性。受试物对各种脏器的干预结果存在一定的剂一效关系。2甜茶素的提取方法优化超声提取法、回流提取法、酶法和微波提取法都是甜茶素提取的有效方法。超声提取法中的提取时间越长,固液比越高,提取率越高;回流提取法提取时间、固液比和浸提次数对浸提率均未见显著差异;微波提取法浸提液pH值越低、功率越高,浸提率越高。与其它提取方法相比,微波提取法从甜茶中提取甜茶素能够缩短浸提时间,提高浸提率;L9 34正交试验探究优化提取条件为在酸性环境下(pH=3),1200W提取30分钟,重复三次即可达到92.43%的浸提率。结论1甜茶素和壳寡糖都能有效的改善实验性糖尿病小鼠的症状,在一定程度上促进胰岛素分泌,降低肝糖原分解,有效的控制血糖,改善脂代谢紊乱,对肝脏、肾脏和胰腺起到一定的保护作用,高、中剂量组的甜茶素和壳寡糖干预效果更为明显。2甜茶素和壳寡糖联合作用结合了两者的各自的优势,既有效的控制了血糖、对胰岛β细胞起到了一定的保护作用,同时又很好的调节了脂代谢紊乱,降低了对脏器的病理损伤。与单独作用相比,联合作用对实验性糖尿病小鼠的治疗效果更为全面和综合,从整体达到了更为理想的治疗效果。3超声提取法、回流提取法、酶法和微波提取法均能有效的提取甜茶中的甜茶素。与其他三种提取方法相比,微波提取法能够有效的提高甜茶素的提取率,降低提取时间,同时具有更好的安全性和密闭性,避免对环境和实验人员造成负担,是一种比较理想的提取甜茶素的方法。