源于人HNRPA2B1/CBX3基因座位的染色质开放元件UCOE包含一个双向启动子及无甲基化的CpG岛,具有染色质重塑功能。当它作为调控元件连接在启动子的上游时能够防止转录沉默,增强转基因的表达水平。为了研究猪UCOE在临床应用中所发挥的功能,本试验筛选了猪最佳UCOE片段。首先利用人UCOE序列进行同源比对得到猪UCOE序列。通过酶切以及RT-PCR方法得到14个不同大小位置的猪UCOE片段,将其分别与pDRIVE5-GFP-2载体连接,构建14个不同大小的载体,转染HEK293T细胞,使用GFP2-hUCOE作为对照,24h后收集细胞,通过RT-PCR及Western blot检测报告基因绿色荧光蛋白GFP的表达量,筛选出能使GFP基因稳定高效表达的最佳UCOE片段,并观察其绿色荧光持续时间。将筛选后的最佳UCOE片段插入重组质粒pCpG-Mini-GFP中进一步验证UCOE片段功能。结果显示,构建猪的14个重组质粒以及GFP2-hUCOE成功在HEK293T细胞进行了过表达。与对照组GFP2-hUCOE相比,p6号质粒GFP的相对表达量最高,且绿色荧光时间持续14天,表明p6号质粒中插入的957bp UCOE片段为最佳调控元件。通过RT-PCR及Western blot结果显示pCpG-Mini-GFP-UCOE的GFP相对表达量高于对照组pCpG-Mini-GFP,这进一步验证了猪UCOE片段具有增强GFP基因表达的功能,从而为实现外源基因在宿主细胞的稳定高效表达提供理论依据。