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1.研究背景及目的慢性炎症是一系列慢性疾病,如肥胖、糖尿病等的共同病理机制。肥胖机体以长期的低度慢性系统性炎症及免疫反应异常、胰岛素抵抗为重要特征,使其易感于重大代谢疾病包括糖尿病等。肥胖是糖尿病的重要病因,二者呈“孪生”流行趋势,且均可促进牙周炎的发展。而关于NLRP3信号通路在其中所起的关键作用的研究匮乏。本研究目的为探讨肥胖及Ⅱ型糖尿病导致的系统性炎症状态对牙周组织炎症的影响及NLRP3信号通路在其中所起的关键作用。2.研究方法(1)饮食诱导16周牙周结扎10天建立肥胖小鼠牙周炎模型,记为正常饮食组、正常饮食结扎组、高脂饮食组、高脂饮食结扎组。(2)体内通过RT-PCR和IHC的方法检测小鼠牙龈组织内NLRP3信号通路(NLRP3,capase1,IL-1β,NFκb)及巨噬细胞表面标记物F4/80、巨噬细胞趋化因子MCP1的表达情况。(3)体外分离培养不同饮食背景的小鼠BMDMs并对其进行LPS刺激,通过RT-PCR及ICC检测巨噬细胞内NLRP3信号通路的表达。(4)收集人类健康组、慢性牙周炎组及慢性牙周炎伴Ⅱ型糖尿病组患者牙龈组织,体内通过RT-PCR及IHC检测牙龈组织内NLRP3信号通路的表达。体外分离培养人牙龈上皮细胞并对其进行高糖及LPS刺激实验,通过RT-PCR及ICC检测上皮细胞内NLRP3信号通路的表达。3.研究结果(1)高脂饲料诱导16w小鼠的体重及血糖明显高于正常饲料组。小鼠牙槽骨吸收:牙周炎组显著高于非牙周炎组,高脂饮食组显著高于正常饮食组。血清胰岛素及炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10表达水平:高脂饮食组显著高于正常饮食组。(2)小鼠牙龈组织中NLRP3,Caspasel,IL-1β及NFκb的mRNA及蛋白质表达水平:牙周炎组显著高于非牙周炎组。(3)小鼠牙龈组织中F4/80及MCP1的mRNA及蛋白质表达水平:牙周炎组显著高于非牙周炎组,高脂饮食组显著低于正常饮食组。BMDMs中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平:LPS刺激组显著高于非刺激组,高脂饮食组显著低于正常饮食组。(4)人牙龈组织中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平:在伴有炎症及Ⅱ型糖尿病的牙龈组织中表达显著性升高。HGECs中NLRP3信号通路因子的mRNA及蛋白质表达水平在高糖刺激后显著升高。4.结论我们发现,肥胖、Ⅱ型糖尿病的机体处于慢性炎症状态均加重了牙周炎的发生发展。肥胖导致感染的牙周组织内巨噬细胞数量减少及活性降低,引起牙周固有免疫的异常,最终加重了牙周炎的局部炎症状况。而Ⅱ型糖尿病患者的高糖状态可能通过牙龈上皮细胞NLRP3信号通路的高表达而加重慢性牙周炎的发生发展。