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目的:研究肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白3(TNFAIP8L3)(TIPE3)在乳腺癌生长和转移中的作用及其分子机制。方法:(1)收集可手术100例乳腺癌患者的100对配对的癌组织、癌旁组织标本及其临床病理资料,采用免疫组化检测TIPE3的表达,分析乳腺癌组织中的TIPE3表达水平及其与乳腺癌患者临床病理因素的相关性。(2)提取人乳腺癌细胞MCF7、SKBR3、MDA-MB-231、MDA-MB-468和用作对照的人正常乳腺上皮细胞MCF10A的总蛋白,q RT-PCR、Western blot检测TIPE3在乳腺癌细胞中的表达。(3)构建TIPE3过表达慢病毒质粒p Lenti6.3/TIPE3/IRES/GFP和TIPE3干扰慢病毒质粒p Lenti6.3/sh RNA-TIPE3/IRES/GFP,然后p Lenti6.3/TIPE3/IRES/GFP、空慢病毒质粒p Lenti6.3/IRES/GFP;p Lenti6.3/sh RNA-TIPE3/IRES/GFP、干扰对照慢病毒质粒p Lenti6.3/sh RNA-control/IRES/GFP分别与辅助质粒p LP1、p LP2、VSV用Lipofectamine2000共转染293T细胞,制备TIPE3过表达慢病毒(LV-TIPE3)、空对照慢病毒(LV);TIPE3干扰慢病毒(LV-sh TIPE3)、干扰对照慢病毒(LV-shcontrol)并滴度测定。(4)TIPE3相对表达低、侵袭转移能力低的MCF7乳腺癌细胞;TIPE3相对表达高、侵袭转移能力高的MDA-MB-231乳腺癌细胞分别用LV-TIPE3、LV;LV-sh TIPE3、LV-shcontrol慢病毒感染,通过灭瘟素(BSD)药物筛选后获得TIPE3过表达MCF7-TIPE3、MCF7-mock(空病毒对照细胞);TIPE3干扰沉默MDA-MB-231-sh TIPE3、MDA-MB-231-shcontrol(干扰对照病毒对照细胞),并荧光显微镜、流式细胞仪、q RT-PCR、Western blot检测慢病毒介导的转基因效率及TIPE3过表达、沉默效率。(5)通过CCK-8、平板细胞克隆形成、PI单染法细胞周期、划痕、Transwell迁移、Transwell侵袭实验,研究TIPE3过表达、沉默对乳腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭的作用。并分别建立BALB/c裸鼠乳腺癌皮下移植瘤和尾静脉注射肺转移模型,通过监测肿瘤体积、重量和肺转移结节,分析TIPE3对乳腺癌细胞在裸鼠体内生长、肺转移能力的影响。(6)Western blot检测TIPE3过表达、沉默对乳腺癌细胞p-AKT(T308)、p-AKT(S473)、AKT、p-GSK3β(S9)、GSK3β、β-catenin、Snail1、Snail1(Slug)、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响。免疫荧光激光共聚焦分析TIPE3对乳腺癌细胞β-catenin、Snail1、Slug的影响,及q RT-PCR检测TIPE3对乳腺癌细胞Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin转录表达的影响。并免疫组化检测TIPE3对裸鼠乳腺癌皮下移植瘤组织中p-AKT(T308)、p-AKT(S473)、AKT、p-GSK3β(S9)、GSK3β、β-catenin、Snail1、Slug的影响。结果:(1)与癌旁组织比较,人乳腺癌组织中TIPE3表达水平升高,且与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期呈正相关。(2)与正常乳腺上皮细胞比较,TIPE3在人乳腺癌细胞中高表达。(3)成功建立了TIPE3稳定过表达乳腺癌细胞株MCF7-TIPE3vs MCF7-mock和TIPE3干扰沉默乳腺癌细胞株MDA-MB-231-sh TIPE3 vs MDA-MB-231-shcontrol。(4)慢病毒介导的TIPE3过表达能明显促进MCF7乳腺癌细胞的增殖、细胞周期G1/S期转换、迁移和侵袭;而TIPE3沉默能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和诱导G1期阻滞。TIPE3沉默也能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞在裸鼠体内的生长和肺转移。(5)TIPE3过表达能明显上调MCF7乳腺癌细胞中p-AKT、p-GSK3β、β-catenin、Snail1、Slug和细胞核β-catenin、Snail1、Slug的水平,及上调Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin和下调E-cadherin的表达;而TIPE3沉默在MDA-MB-231乳腺癌细胞及其裸鼠乳腺癌皮下移植瘤组织中呈现相反的效应。结论:TIPE3在乳腺癌中表达升高,很可能通过AKT-GSK3β-β-catenin/Snail途径促进乳腺癌的生长和转移。TIPE3可能是乳腺癌的一个新的潜在治疗靶标。