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目的 肝纤维化是各种肝损伤的共同结果，肝星状细胞(HSC)是肝纤维化形成的细胞基础，许多细胞因子参与了肝纤维化和肝硬化的形成，，分子机理表明，在许多细胞因子参与中，转化生长因子β1(TGF-β1)在HSC的激活、细胞外基质的聚积起着非常关键的作用，RNA干扰(RNAi)是一种能达到特异性抑制目的基因表达的现象，已成功地下调了一些内源性基因的表达。我们目的是通过构建表达TGF-β1小干扰RNA(siRNAs)的psu6TGF质粒，观察其在肝星状细胞中对HSC的信号激活和胶原的影响。 方法 (1)从NCBI网站获得大鼠TGF-B1的cDNA序列，根据Ambion公司网上设计软件设计三个siRNA作用靶点，相应的双链DNA被插入pSilencer2.1-U6质粒中，即，siTGFA、siTGFB、 siTGFC；(2)以脂质体Metafectene2000转染含荧光素基因(GFP)的质粒于HSC-T6细胞中，观察转染效率：(3)为了得到高效沉默TGF-β1siRNA，利用脂质体Metafectene2000将各组siRNA 1ug，2ug，4ug，6ug，8ug转染HSC-T6细胞，观察沉默效果。然后，将最佳沉默siRNA导入HSC-T6细胞，分别在1，3，5天提取细胞mRNA和蛋白，并收集上清液；(4)RT-PCR检测TGF-β1，Ⅰ，Ⅲ型胶原，smad3、smad7的mRNA表达；(5) West-Blot检测TGF-β1和a-SMA的蛋白表达；(6)放射免疫法测细胞上清液透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型前胶原含量变化；(7)免疫组化检测Ⅰ型用胶原蛋白表达 结果 (1)表达针对TGF-β1siRNA的质粒是成功构建的：(2)脂质体转染siRNA效率达70％：(3)6ug siRNA为最佳剂量，siTGFA、siTGFB、 siTGFC，对TGF-β1mRNA的抑制率分别为60％、68％、0％；和West-Blot检测TGF-β1蛋白表达结果基本一致：(4)转染6ugsiTGFB 1，3，5天后，smad3、smad7的mHNA下调分别为0％、61％、70％和0％、15％、16％；a-SMA的蛋白表达下调分别为0％、69％、78％；Ⅰ，Ⅲ mRNA型胶原下调分别为0％、59％、66％和o％、55％、60％；Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少；上清液透明质酸、Ⅲ型前胶原、IV型前