论文部分内容阅读
用北京万泰生物药业有限公司提供的动物用总抗戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）抗体试剂盒，采用双抗原夹心法，检测采自上海7个区7个规模猪场的4、9和18周龄生长猪、后备母猪、经产母猪血清样品共252份，8个奶牛场的奶牛血清样品96份，宠物门诊宠物犬血清样品43份，农贸市场鸡血清样品20份，鸭血清样品24份，上海野生动物园野天鹅等珍禽血清样品35份，以了解上海地区HEV抗体在以上动物中的分布情况。结果表明：88.8％（222／252）的猪，27.9％（12／143）的宠物犬，23.9％（23／96）的奶牛，检测到HEVIgG，鸡，鸭，珍禽没有检测到HEVIgG。4、9和18周龄猪、后备母猪及经产母猪抗体水分别为2.01±1.46、1.27±0.77、1.65±1.40、2.81±1.34、2.85±1.23；抗体阳性率分别为85.8％（42／49）、84.3％（59／70）、80.9％（52／63）、97.1％（34／35）、100.0％（35／35）。猪场和奶牛场的场阳性率均为100％。表明上海地区猪群感染HEV很普遍，奶牛和宠物犬感染HEV的比例也很可观。 根据不同基因型的HEV ORF2中507bp保守序列设计兼并引物，用逆转录套式聚合酶链方法（Reverse transcription nested polymerase chain reaction，RT-nPCR）检测猪粪中HEV RNA。在上海市九个区中，每区随机抽取2个规模猪场，每场收集18份2-3月龄猪的粪样，对其中13个猪场每场随机采集13份1月龄以下猪的粪样，4个猪场每场采集母猪粪17份，共计561份。从新疆三个地区五个猪场随机采集2-3月龄猪粪98份（部分检测）。结果表明，HEV RNA阳性率1月龄猪粪样品为8.2％（14／169），阳性场率为15.4％（2／13）；2-4月龄猪粪样品阳性率为16.9％（55／324），阳性场率为72.2％（13／18）；母猪粪样品阳性率为17.6％（12／68），阳性场率为75％（3／4）。将PCR扩增产物克隆pMD-18T载体上，构建成重组质粒，并将6个上海、3个新疆重组质粒测序，用DNASTAR软件进行同源性分析，Clustalx和Mega3.0软件绘制基因进化树。与53个猪源和人源HEV相比，6个上海株507bp与Ⅳ型的核苷酸同源性为85.6％～88.2％，与Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ型为76.6％～82.5％，6个上海株间的核苷酸同源性为94.1％～99.0％。3个新疆株507bp与Ⅳ型的核苷酸同源性为84.6％～90.4％，与Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ型为76.8％～81.7％，3个新疆株间的核苷酸同源性为86.1％～98.2％。6个上海株与3个新疆株间的核苷酸同源性为85.7％～88.0％。9株HEV都属于Ⅳ型。与两年前20个新疆猪HEV ORF2中的348bp序列相比，一株新疆猪HEV株与来自同一地域的7株