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目的:肿瘤细胞提呈抗原给T细胞时,由于表面缺乏共刺激分子的表达,不能起始有效的抗肿瘤免疫应答。为了将共刺激分子导入肿瘤细胞以制备肿瘤疫苗,我们将表达B7-H3基因的真核表达载体pEGFP-C1-B7-H3转染入口腔鳞癌细胞Tca8113中,检测B7-H3基因在转染口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达,进一步研究转人B7-H3基因鳞癌细胞疫苗体外诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:采用脂质体介导法将真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3转染入人鳞癌细胞Tca8113中,转染24h,14d,30d后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,待转染成功后,用RT-PCR检测基因B7-H3在转染细胞中的表达;用Western blot检测其蛋白的表达,经G418筛选后获得稳定高表达克隆。以丝裂霉素C(MMC)处理后,制成肿瘤细胞疫苗,经体外与人外周血淋巴细胞共同培养后,测定淋巴细胞特异性杀伤活性及对淋巴细胞产生细胞因子的影响。结果:用Lipofectamine2000细胞转染试剂盒把pEGFP-C1-B7-H3载体转入口腔鳞癌细胞株Tca8113中后,于24h、14d、30d时,在10×20倍倒置显微镜下用荧光观察细胞(光波波长488nm或513nm),同时与未转染质粒的口腔鳞癌细胞Tca8113做对照。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,用Trizol从转染了pEGFP-C1-B7-H3的Tca8113细胞中提取总RNA,然后用RT-PCR检测B7-H3的表达,PCR产物电泳结果表明,扩增产物的大小约215bp,与预期的大小一致。转染空载体pEGFP-C1的Tca8113细胞中,没有检测到215bp的PCR产物。用Western blot方法抽提B7-H3/Tca8113基因转染细胞,裂解已转染pEGFP-C1-B7-H3的Tca8113细胞(B7-H3/Tca8113)的基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约84～90KD大小的特异性条带;而mock/Tca8113没有特异性条带。经过G418筛选后挑取单克隆法建立了B7-H3/Tca8113细胞株。转染B7-H3的Tca8113细胞能够高表达B7-H3蛋白。经MMC处理后,与野生型的Tca8113细胞相比,上述瘤苗对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可促进其体外增殖,诱导淋巴细胞产生针对Tca8113的特异性杀伤作用,能显著增强淋巴细胞分泌IFN-γ的能力。结论:用脂质体法把真核表达载体pEGFP-C1-B7-H3转染到口腔鳞癌细胞Tca8113中,用挑选单克隆法建立了稳定表达B7-H3蛋白的细胞株,用RT-PCR及Western blot鉴定B7-H3基因在该细胞中有表达。B7-H3/Tca8113经MMC处理后得到TCV-hB7-H3,将其与T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可促进其体外增殖,诱导淋巴细胞产生针对Tca8113的特异性杀伤作用,能显著增强淋巴细胞分泌IFN-γ的能力。转B7-H3基因人鳞癌细胞疫苗能诱导有效的抗鳞癌免疫反应。为以后在体内试验中研究B7-H3对免疫细胞的调节和肿瘤基因治疗奠定了基础。