急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是由多种病因引起的胰酶激活,以胰腺局部炎症为主要特点,伴或者不伴有其他器官功能障碍的疾病,重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)须伴有持续性的器官衰竭,按照亚特兰大分类标准,约10%急性胰腺炎患者归为严重分级,病死率较高,急性肺损伤是急性胰腺炎的一个严重的并发症,在SAP中,急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的死亡率为30%~40%,目前对于SAP相关性肺损伤没有特效的治疗方法。核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)是一个中心转录因子,NF-κB家族由P50,P52,REL,P65和REL-B组成,控制着多种炎症基因的表达,例如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)和诱导型一氧化氮合酶。水通道蛋白是一种小的膜蛋白,选择性和双向通过细胞膜快速促进水的转运,通过AQP5可以反应肺组织水的转运情况,进而反应肺水肿的严重程度。姜黄素是一种植物多酚,由姜科植物黄色香料中提取。调节转录因子如NF-κB,粘附分子,酶等,在炎症和癌症中具有重要作用,联苯二氟酮EF24是一种合成的姜黄素的类似物,研究发现姜黄素类似物EF24可以抑制NF-κB活性,减少促炎症细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA表达和分泌,在炎症反应中起作用。研究显示在大鼠出血性休克模型中给予联苯二氟酮EF24治疗,能够抑制IL-1受体通路,减少血清中TNF-α、IL-6浓度,减少出血性休克引起的肺炎症。本实验研究目的是探索联苯二氟酮EF24对重症胰腺炎的肺损伤的炎症抑制作用。目的:本实验旨在通过HE染色观察SAP时胰腺、肺组织组织学的变化,检测肺湿干重比,瑞氏染色观察肺泡灌洗液细胞计数,Real-Time PCR、Western-blot方法检测肺AQP5 mRNA、p65 mRNA及蛋白表达,ELISA方法测定血清TNF-α、IL-6、肺泡灌洗液中TNF-α水平,探索联苯二氟酮EF24对重症胰腺炎肺损伤的作用,为治疗重症急性胰腺炎肺损伤提供新的方法。方法:1将60只sprague-dawley(sd)大鼠随机分成对照组(con组)、重症急性胰腺炎组(sap组)和联苯二氟酮ef24组(ef24组),每组再分为6h、12h2个亚组,每组大鼠各10只。2重症急性胰腺炎sap组、联苯二氟酮ef24组大鼠分别给予间隔1h,共2次,每次腹腔内注射同等剂量的20%l-精氨酸(3.0g/kg);对照con组大鼠给予间隔1h,共2次,每次腹腔内注射与l-精氨酸同等剂量的0.9%nacl;造模成功后1h,联苯二氟酮ef24组大鼠给予腹腔内注射联苯二氟酮ef24(0.4mg/kg);con组、sap组大鼠给予腹腔内注射聚乙二醇400溶剂(聚乙二醇:nacl=1:1)。3分别于造模后6h、12h留取胰腺组织、肺组织和血液,通过he染色观察胰腺、肺的组织学变化,留取肺组织标本,检测肺湿干重比,瑞氏染色观察肺泡灌洗液中细胞计数,elisa法检测血清内il-6、tnf-α水平及检测肺泡灌洗液中tnf-α水平,采用real-timepcr、western-blot的方法检测比较三组肺组织aqp5mrna、p65mrna及蛋白的表达变化。4所有计量数据资料采用(mean±sd)表示,利用spss21.0软件包行统计分析。p<0.05为差异显著,具有统计学意义。结果:1he染色:结果示sap组、ef24组分别与con组比较,胰腺组织损伤严重程度增加,并且随着时间发展,胰腺损伤逐渐加重。依据mayer、osman等评分标准,肺组织病理评分结果显示sap组、ef24组的肺组织病理损伤加重,其中ef24组肺组织损伤程度较sap组减轻;2肺湿干重比:统计结果显示:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比,肺湿干重比明显升高,具有统计学差别(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比,肺湿干重比显著降低,具有统计学差别(p<0.01);各组中两个亚组相比,con组两个亚组相比,肺湿干重比无明显差异(p>0.05),在sap组、ef24组中,12h组肺湿干重比比6h肺湿干重比显著升高,具有统计学差别(分别p<0.01,p<0.05);3肺泡灌洗液细胞计数:统计结果显示:sap组、ef24组各个时间点分别与con组各个时间点相比较,肺泡灌洗液总细胞计数明显升高,具有统计学意义(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比较,ef24组肺泡灌洗液总细胞计数降低,具有统计学意义(p<0.01);各个组的两个亚组相比,con组6h组、12h组肺泡灌洗液细胞总数计数无明显统计学差异(p>0.05),sap组、ef24组12h组肺泡灌洗液细胞总数计数高于6h组,具有统计学差异(均为p<0.01);sap组、ef24分别与con组各个时间点相比较,肺泡灌洗液巨噬细胞、淋巴细胞计数显著高于con组(均为p<0.01),ef24组与sap相比较,肺泡灌洗液中巨噬细胞、淋巴细胞明显减少,具有统计学意义(p<0.01);4血清il-6的水平:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比较,sap组、ef24组血清il-6水平显著升高(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比,血清il-6水平显著下降,具有统计学差别(p<0.01);con组、ef24组两个亚组之间相比,6h、12h两个时间点之间均无显著差异(均为p>0.05),sap组6h、12h两个时间点相比,12h血清il-6水平明显高于6h组,有统计学差异(p<0.01);5血清tnf-α的水平:sap组、ef24组分别与con组各个时间点比较,大鼠血清tnf-α浓度显著升高,具有统计学差别(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比,ef24组明显下降,具有统计学差别(p<0.01);三个组的两个亚组之间相比,con组、ef24组6h、12h两个亚组无显著差异(均为p>0.05),sap组12h组显著高于6h组,具有统计学差别(p<0.01);6肺泡灌洗液tnf-α的水平:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比较,sap组、ef24组肺泡灌洗液tnf-α的水平明显升高,具有统计学差别(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比,ef24组明显下降,具有统计学差别(p<0.01);三个组的亚组相比较,其中con组、ef24组6h、12h组的肺泡灌洗液tnf-α水平无统计学差异(均为p>0.05),sap组的6h、12h相比较,12h肺泡灌洗液tnf-α水平明显高于6h肺泡灌洗液tnf-α水平,具有统计学差异(p<0.01);7肺组织aqp5蛋白表达:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比较,sap组、ef24组肺组织aqp5蛋白量均明显降低(均为p<0.01),具有统计学差别;ef24组与sap组各个时间点相比,aqp5蛋白量明显上升(p<0.01),具有统计学差别;con组、ef24组6h、12haqp5蛋白表达量无统计学差别(均为p>0.05),sap组两个亚组相比,6haqp5蛋白表达的量明显高于12haqp5蛋白表达的量,具有统计学差别(p<0.05);8肺组织p65蛋白表达:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比,sap组、ef24组肺组织p65蛋白量均显著升高(均为p<0.01),具有统计学差别;ef24组与sap组各个时间点相比,ef24组p65蛋白表达显著下降(p<0.01);三个组的亚组相比,con组、ef24组6h、12hp65蛋白表达无统计学差别(均为p>0.05),sap组两个亚组相比,12h组p65蛋白表达的量明显高于6h组,具有统计学差别(p<0.01);9肺组织aqp5mrna表达:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比较,sap组、ef24组aqp5mrna表达的量较con组明显下降(均为p<0.01),具有统计学差别;ef24组与sap组各个时间点比较,aqp5mrna表达的量明显升高,有的统计学差别(p<0.01);con组、ef24组6h、12h相比,aqp5mrna表达量无统计学差异(均为p>0.05),sap组两个时间点相比,6haqp5mrna的量明显高于12haqp5mrna的量,具有统计学差别(p<0.05);10肺组织p65mrna表达:sap组、ef24组分别与con组各个时间点相比,sap组、ef24组p65mrna表达量明显升高,具有统计学差别(均为p<0.01);ef24组与sap组各个时间点相比,ef24组p65mrna的量明显减少,有统计学差别(p<0.01);三组的各个亚组之间相比较,con组、ef24组p65mrna量6h、12h时间点相比,p65mrna表达量无显著差异(p>0.05),sap组6h、12h时间点相比,12h肺组织p65mrna的表达量明显高于6hp65mrna表达量,具有统计学意义(p<0.05)。结论:1ef24能上调aqp5的表达量,下调p65表达量,减轻sap时肺部炎症,对sap大鼠肺损伤有保护作用。2ef24降低促进炎症因子tnf-α、il-6的表达,减轻sap肺组织的炎症反应。3ef24对于减轻sap肺损伤的机制可能是抑制nf-κb信号通路激活,下调炎症细胞因子tnf-α、il-6表达,上调aqp5表达。