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近年来，在基因功能的研究中，位点特异性重组（site-specific recombination）系统作为一个强有力的工具在体内和体外实验中得到了广泛应用。通过结合特异的靶序列，位点特异性重组系统可以诱导DNA序列的删除、插入以及置换等。第一个广泛地应用于哺乳动物及其细胞的位点特异性重组系统是来源于P1噬菌体的Cre-loxp系统；第二个是来自于啤酒酵母的FLP/FRT系统；第三个是来源于链霉菌噬菌体的ФC31系统。本研究的目的是验证FLP/FRT重组系统的删除作用在PK-15（猪肾上皮细胞）和PEF（猪胚胎成纤维细胞）中是否有效，并验证其在PK-15细胞系中进行基因重组的效率。为达到此目的，构建了三个载体：FLP重组酶游离表达载体pCEP4-FLP，该载体应用了在37℃具有热稳定性的FLP重组酶突变体FLP0，并依据猪的密码子偏爱性对FLP0进行了优化，使其在PK-15细胞中能够高效表达，pCEP4-FLP还具有不整合进细胞染色体而实现高效表达的特性；EGFP条件性表达载体pEF1α-FRT-stop-FRT-GFP，该载体在EF1α启动子和EGFP基因之间引入两个同向FRT位点锚定的终止序列。只有当FLP重组酶存在时，FRT位点间的终止序列被删除，EF1α启动子才能启动绿色荧光蛋白的表达；删除载体pcDNA3.1-FRT-EF-GFP-FRT，该载体在EF1α启动子和EGFP表达基因的两侧插入两个同向FRT位点，当FLP重组酶存在时，FRT位点间EGFP表达框被删除。将载体pcDNA3.1-FRT-EF-GFP-FRT和载体pCEP4-FLP先后瞬时转染进PK-15细胞和PEF细胞中，检测到了EGFP的表达。经G418筛和EGFP的筛选得到稳定表达删除载体pcDNA3.1-FRT-EF-GFP-FRT的PK-15细胞系，FLP重组酶的游离表达载体pCEP4-FLP转染PK-15细胞系，观察到了EGFP阳性细胞所占比例下降。通过细胞流式技术统计了EGFP阴性细胞的比例，得到了FLP/FRT系统在PK-15细胞系中进行基因重组的效率。为该位点特异性系统应用于无选择标记基因的转基因猪的构建奠定基础。