【摘 要】
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目的:通过观察橙皮素基于Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞系AGS增殖、迁移,并诱导其凋亡的作用,揭示橙皮素的抗胃癌分子机制。方法:1.橙皮素对AGS增殖和凋亡影响（1）通过MTT比色法,观察并评价经过橙皮素干预后AGS细胞的增殖活力,计算细胞存活率并计算其IC50。（2）流式细胞术观察经橙皮素干预后AGS细胞的凋亡情况。（3）免疫印迹法（Western-blot,WB）检测凋亡相关B
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目的:通过观察橙皮素基于Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞系AGS增殖、迁移,并诱导其凋亡的作用,揭示橙皮素的抗胃癌分子机制。方法:1.橙皮素对AGS增殖和凋亡影响（1）通过MTT比色法,观察并评价经过橙皮素干预后AGS细胞的增殖活力,计算细胞存活率并计算其IC50。（2）流式细胞术观察经橙皮素干预后AGS细胞的凋亡情况。（3）免疫印迹法（Western-blot,WB）检测凋亡相关Bcl-2家族蛋白的表达情况。（4）Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3/8/9酶活性。2.橙皮素对AGS迁移的影响（1）划痕实验评价橙皮素对AGS细胞迁移的影响,计算细胞迁移率。（2）Western-blot 法检测上皮-间质转化相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、Snail-1 表达的影响。3.橙皮素对Wnt信号通路的影响Western blot 法检测 Wnt/β-catenin 信号通路相关蛋白 wnt3a、β-catenin、磷酸化 β-catenin、LRP6及磷酸化LRP6的表达情况。4.激活Wnt/β-catenin信号通路后橙皮素对AGS增殖、迁移和凋亡的作用先使用Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl干预AGS,而后再使用橙皮素处理,最后Western blot法检测相关蛋白的表达情况。结果:1橙皮素可有效抑制AGS细胞的增殖,并且呈现时间、浓度依赖性,经软件拟合计算,得出其半数抑制浓度（IC50）为677.6 μmol·L-1;橙皮素能够通过对抑凋亡相关蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax表达的调控,诱导细胞发生凋亡。橙皮素还可以剂量依赖性地使Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 酶活性增加。2橙皮素可显著抑制AGS细胞的划痕修复能力。可通过下调细胞间质属性蛋白N-cadherin和转录因子Snail1,上调上皮属性蛋白E-cadherin的表达,达到抑制AGS细胞上皮-间质转化进程的效果。3橙皮素可以降低Wnt3a、磷酸化β-catenin、和磷酸化LRP6的表达,并呈剂量依赖性,随着给药剂量的增加,对上述蛋白的表达抑制愈加明显,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路。4经Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl干预后,橙皮素对AGS细胞的抗增殖、抗迁移和诱导凋亡作用有不同程度的减弱。结论:1.橙皮素对人胃腺癌AGS细胞的增殖活性有一定的抑制作用,且可诱导AGS发生凋亡。2.橙皮素可通过降低AGS细胞的划痕修复能力、抑制上皮-间质转化过程,发挥减弱胃癌细胞AGS迁移能力的作用。3.橙皮素调控Wnt/β-catenin信号通路,发挥抑制胃癌细胞增殖、迁移,诱导其凋亡的作用。
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