据流行病学统计结果显示,女性癌症人群中乳腺癌患病率高居首位且逐年上升,已严重威胁到女性的健康。目前,化疗是乳腺癌临床治疗的主要手段,但是临床上常用的化疗药物(例如紫杉醇)无法彻底清除乳腺肿瘤细胞,同时伴随着严重的毒副作用。近年来,随着纳米技术在生物医药领域的发展,许多纳米药物已被用于乳腺癌的临床治疗中。其中脂质体作为一种具有良好生物安全性、高载药量等优势的药物载体,成为最早被用于临床的纳米药物载体之一。然而,脂质体纳米药物仍面临着合成规模有限、无法避免有毒溶剂使用等问题,难以大批量生产。近年来,人们发现植物中含有大量的天然脂质纳米囊泡,不仅生物安全性好,同时其内部含有的天然有机小分子可有效治疗炎症、肿瘤等疾病。由于该纳米囊泡来源广泛、成本低廉且疗效显著,因此具有非常好的临床应用前景。鉴于此,本论文以茶树花为原料,通过差速离心法从中分离、纯化获得大量的脂质纳米囊泡(TFNPs),通过检测发现该囊泡中富含多种儿茶素和黄酮类活性物质,随后通过一系列体内外实验证明其具有良好的抗肿瘤活性和生物安全性。本论文的主要研究内容和研究结论分为以下四部分:第一部分,TFNPs的体外形态学表征。通过使用动态光散射技术分析TFNPs的粒径和表面电位。使用透射电镜观察TFNPs的形貌。结果:TFNPs形状为球形,粒径约为131.6 nm,表面电位为-7.94 mV,且在胃肠道模拟液和体液模拟液中均有着较好的稳定性。第二部分,TFNPs体外抗肿瘤效果评价。使用MTT检测法检测TFNPs对多种肿瘤细胞(MCF-7、4T1、A549和Hela)增殖的抑制作用。使用Annexin V-FITC/PI染色法检测TFNPs诱导细胞凋亡能力。通过PI染色法检测肿瘤细胞的细胞周期状况。通过使用细胞划痕和transwell实验检测TFNPs抑制肿瘤细胞浸润和迁移的能力。使用流式细胞仪和共聚焦显微镜分别定量和定性分析TFNPs处理后肿瘤细胞内活性氧簇和活性氮簇的含量变化。最后,使用DiO荧光标记TFNPs,检测TFNPs被肿瘤细胞吞噬的能力。研究发现TFNPs表现出对MCF-7细胞最大的增殖抑制能力,72 h时IC50值达0.1μg/mL。TFNPs可显著诱导两种乳腺癌细胞发生凋亡,线粒体膜电位降低,且细胞内cleaved-caspase 3表达量显著增加,而Bcl-2表达量显著降低。TFNPs可将MCF-7细胞阻滞在G2/M期,而将4T1细胞阻滞在S期,进而抑制细胞的增殖。TFNPs可显著抑制MCF-7和4T1的浸润和迁移。此外,TFNPs可有效地提高两种结肠肿瘤细胞胞内活性氧簇和活性氮簇的表达。细胞吞噬实验显示,TFNPs可显著地被细胞吞噬,且广泛分布在细胞质中。第三部分,TFNPs体内抗肿瘤效果评价。采用MCF-7细胞和4T1细胞分别构建皮下乳腺癌模型和乳腺癌肺转移模型,并选用静脉注射和口服两种给药方式。皮下乳腺癌肿瘤实验中,通过分析小鼠体重、肿瘤体积变化、肿瘤重量、组织染色等方法综合分析TFNPs抑制皮下乳腺癌增殖的能力。乳腺癌肺转移瘤实验中,通过分析小鼠体重、肺转移瘤节数及组织染色等方法综合分析TFNPs抑制乳腺癌肺转移能力。结果显示,皮下乳腺癌肿瘤实验中,静脉注射和口服高剂量的TFNPs均可以有效抑制肿瘤的增长,抑制率分别达75.8%和65.1%,表现出较好的治疗效果。在乳腺癌肺转移实验中,同样地静脉注射和口服高剂量的TFNPs均可以有效抑制乳腺癌细胞在肺部组织的转移,进而可以有效地延长患病小鼠的生存时间,且两组治疗效果无显著性差异。第四部分,TFNPs体内外安全性评价。首先通过体外溶血实验证明TFNPs不会导致严重的溶血现象。然后将TFNPs通过静脉注射和口服分别多次给予健康小鼠,通过从免疫因子、补体、肝肾毒性、组织染色等方面综合评价TFNPs的体内安全性。结果:静脉注射TFNPs可引起血浆中补体C3、谷丙转氨酶表达量异常增大,通过分析五脏切片,推测静脉注射TFNPs会对肝脏造成较大毒副作用。而口服TFNPs组小鼠各项指标均正常,与正常组小鼠无显著性差异。综上所述,本项目不仅为茶树花的实际应用开辟了一条新道路,还为乳腺癌的临床治疗开启了一个新的研究思路。总之,该项目的开展有着很大的实用价值和临床转化意义。