论文部分内容阅读
海南是中国最大的香蕉种植基地,尤其是反季节香蕉的优良种植地。香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)引起的土传病害,已在海南造成相当大的危害,香蕉种植面积正以每年15~20%的速度减少,目前尚缺乏有效的防治方法。木霉菌是一类重要的植物病害生防菌,广泛分布于自然界,容易分离培养,对多种植物病原菌具有一定的抑制作用。本研究主要从海南儋州、乐东、文昌等县的香蕉种植园采集土样,从中分离防治香蕉枯萎病的木霉,经对峙培养、挥发及非挥发性物质抑菌实验、盆栽苗防病试验、与香蕉分泌物亲和性试验,获得防效好的木霉菌株。经过研究取得如下结果:1、采集土样147份,共分离木霉247株,被鉴定为五个主要木霉种:长枝木霉(Trichoderma. longibrachiatum)、棘孢木霉(T.asperellum)、康氏木霉(T.koningiopsis)、黄绿木霉(T.aureoviride)、绿色木霉(T.viride),其中棘孢木霉和康氏木霉占了总分离株数的45%;通过与尖孢镰刀菌FOC4-R2进行对峙培养,初步筛选出对病原菌有较好抑制作用的木霉菌75株,结合体外拮抗作用及综合评价,最终选出10株对尖孢镰刀菌具有较好拮抗作用的木霉菌;比较不同木霉菌株对香蕉根际分泌物的亲和能力,发现木霉T2024对香蕉根际分泌物的亲和能力比较强。2、对五个木霉种代表株进行生理生化试验表明,不同代表株在接触酶、明胶水解、淀粉水解、纤维素分解、果胶水解等试验中都表现出阳性,说明木霉菌属在生长代谢过程中产生一系列水解酶;几丁质酶活及其最适反应条件测定发现,10株供试木霉菌表现出较高几丁酶活,产酶高峰出现在72h和120h,最适酶活反应条件为45~55℃,pH6.0-7.0。3、对木霉生防机理研究表明,木霉菌对尖孢镰刀菌有很强的空间竞争作用和寄生作用;木霉菌代谢物对尖孢镰刀菌具有一定的抑制作用,抑菌率大部分都达到50%以上,总体来说,木霉难挥发性代谢物抑菌效果明显的高于易挥发性代谢物质;另外,木霉T2024发酵液能有效抑制病原FOC4-R2孢子萌发,发酵原液及2倍稀释液抑制率都达到90%以上,能使病原孢子缢缩、扭曲、膨胀及变形;但木霉发酵液活性物质热稳定性一般,处理温度高于70℃时,抑菌效果急速下降,而且易受一些物理因素影响而失活,常温下不耐贮存。4、木霉T2024液-固发酵条件优化结果表明,葡萄糖与蔗糖是比较理想的外加碳源,酵母膏为最佳外加氮源,产孢量达4.7×109cfu/ml,碳氮比在10:1至15:1之间较为合适,产孢量分别为5.5×109cfu/ml和5.0×109cffu/ml,无机盐的添加对木霉的产孢量影响显著,木霉菌T2024最适生长温度28℃,温度过低,生长缓慢,产孢量低,温度过高,菌体较快老化衰亡,其次最适pH范围在6.5~7.5之间,T2024液体发酵培养时,第3d开始产孢,第6d产孢量最大,光照能促进木霉菌产孢;另外,固体发酵培养试验结果发现,麸皮与稻壳以1:4比例混合最适合木霉菌生长繁殖,产孢量达2.8×109cfu/g,在固体发酵培养中,培养基含水量按25%,接菌量为6%时,产孢量最大。5、盆栽苗试验,经木霉T2024预处理后的盆栽苗发病率可以控制在20%以下,菌株T2002、TN3、TN7、LJi、T2026、LB3、BB2、BB5、LB13、T2024防病效果都达到70%以上;相关防御酶活性测定结果表明,经木霉T2024+病原FOC4-R2发酵液处理的幼苗,其POD、PPO、PAL酶活性均在喷施处理3-6天后达到了最大值,且在整个处理期间,各处理防御酶活性均高于对照;定植测定表明木霉菌在无菌土中具有一定的定殖能力。