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目的检测血小板反应蛋白4（THBS4）在肝细胞癌患者中的表达水平,评估THBS4与甲胎蛋白（AFP）,AFP异质体（AFP-L3）,高尔基体蛋白73（GP73）单独及联合检测对肝细胞癌的诊断价值,提高AFP阴性肝细胞癌的诊断水平。方法1.收集16例AFP阴性肝细胞癌患者癌组织及其对应癌旁组织;2.收集110例肝细胞癌患者（其中AFP＜20ng/ml 48例,AFP 20-200ng/ml 21例,AFP＞200ng/ml 41例）,24例肝内胆管癌患者,32例肝硬化患者,32例慢性肝炎患者,26例其他消化道恶性肿瘤患者,33例健康体检者及13例治疗后肝细胞癌患者共270例血清标本及临床病理资料;3.Western Blotting和q RT-PCR检测AFP阴性肝细胞癌患者癌组织及其对应癌旁组织中THBS4蛋白及m RNA的表达;4.ELISA检测THBS4和GP73,电化学发光法检测AFP和AFP-L3在肝细胞癌、肝内胆管癌、肝硬化、慢性肝炎、其他消化道恶性肿瘤患者及健康体检者血清中的表达水平,计算AFP-L3比率（AFP-L3R）;5.通过ROC曲线分析比较THBS4与AFP、AFP-L3、GP73单独及联合对肝细胞癌的诊断价值,同时计算曲线下面积、灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值;分析在不同AFP浓度（＜20ng/ml,20-200ng/ml,＞200ng/ml）时的肝细胞癌患者与良性肝病患者间血清THBS4的表达差异,通过ROC曲线计算曲线下面积,灵敏度,特异度以比较THBS4与AFP-L3,GP73对不同AFP浓度肝细胞癌的诊断价值;通过Logistic回归分析THBS4与AFP-L3,GP73联合对AFP阴性肝细胞癌的诊断价值;比较肝细胞癌患者治疗前后血清THBS4水平的变化;分析血清THBS4水平与肝细胞癌患者临床特征的相关性及与疾病进展的关系。结果1.THBS4在AFP阴性肝细胞癌组织中较癌旁组织显著高表达;2.血清THBS4、AFP、AFP-L3、GP73在各疾病组的表达水平:血清THBS4在肝细胞癌患者中的水平较肝硬化、慢性肝炎及健康体检者均显著升高,肝内胆管癌患者血清THBS4表达水平也明显高于肝硬化、慢性肝炎患者及健康体检者的表达水平;血清AFP和AFP-L3在肝细胞癌患者中的表达水平较肝硬化、慢性肝炎、肝内胆管癌、其他消化道恶性肿瘤和健康人显著升高（P＜0.01）;血清GP73在肝细胞癌患者中的表达水平较慢性肝炎、其他消化道恶性肿瘤及健康人显著升高,但在肝细胞癌与肝内胆管癌、肝硬化间的表达无明显差异;3.血清THBS4、AFP、AFP-L3、GP73对肝细胞癌的诊断价值:血清THBS4鉴别肝细胞癌和肝硬化、慢性肝炎患者、健康人的AUC分别为0.709、0.703、0.782（P＜0.001）,诊断性能略差于AFP（AUC分别为0.736、0.758、0.89）;血清THBS4对鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎患者的价值略差于AFP-L3（AUC分别为0.73、0.739）;血清THBS4鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎患者的价值优于GP73（AUC分别为0.593、0.672）;4.血清THBS4、AFP、AFP-L3和GP73联合对肝细胞癌的诊断价值:当AFP和GP73分别联合THBS4时鉴别肝细胞癌和非肿瘤（肝硬化+慢性肝炎+健康体检者）的AUC较各自单独检测时有所升高,但提升不显著,当AFP-L3联合THBS4时的AUC为0.828,较各自单独检测时升高明显,但灵敏度仅为55.45%,对肝细胞癌的早期识别能力欠佳,当THBS4、AFP、AFP-L3和GP73四者联合诊断时的诊断性能最优,AUC为0.846,灵敏度和特异度分别为79.09%、76.29%。5.不同AFP浓度的肝细胞癌患者和良性肝病患者间血清THBS4表达水平比较:在AFP＜20ng/ml组中,肝细胞癌患者血清THBS4的表达水平显著高于良性肝病患者;在AFP 20-200ng/ml组中,肝细胞癌患者血清THBS4的表达水平也显著高于良性肝病患者;在AFP＞200ng/ml组中,肝细胞癌患者与良性肝病患者血清THBS4的表达水平无明显差异;6.血清THBS4、AFP-L3、GP73对不同AFP浓度肝细胞癌患者与非肿瘤患者的鉴别价值:在AFP＜20ng/ml组,THBS4鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎、健康人和非肿瘤的AUC分别为0.632、0.604、0.744、0.670,GP73鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎、健康人和非肿瘤的AUC分别为0.6、0.752、0.959、0.740,AFP-L3鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎、健康人和非肿瘤的AUC为0.531,0.531,0.521,0.531,THBS4对AFP阴性肝细胞癌具有一定的诊断能力,其诊断性能与GP73相当,优于AFP-L3;当AFP 20-200ng/ml组,THBS4鉴别肝细胞癌与肝硬化、慢性肝炎和非肿瘤的AUC分别为0.836、0.976、0.879,总体上与AFP-L3（AUC分别为0.876、0.815、0.857）的诊断性能相当,而GP73的诊断性能不佳;7.血清THBS4、AFP-L3、GP73单独及联合对AFP阴性肝细胞癌的诊断价值:以AFP阴性的非肿瘤患者为对照,在单项检测时THBS4诊断AFP阴性肝细胞癌的AUC为0.67,优于AFP-L3（AUC为0.531）;当THBS4、AFP-L3、GP73三者联合时的诊断性能最高,AUC为0.754,灵敏度为83.33%,特异度为67.5%,联合诊断对AFP阴性肝细胞癌诊断效力较AFP-L3及THBS4单项诊断时均有所提升（P＜0.05）;8.血清THBS4水平在治疗后的肝细胞癌患者中较治疗前降低;9.血清THBS4水平与肝细胞患者的肿瘤数目、分化程度、血管浸润与否、BCLC分期显著相关（P值均＜0.05）。结论1.血清THBS4对AFP阴性和轻度升高的肝细胞癌具有一定的诊断价值;2.血清THBS4与AFP、AFP-L3、GP73联合可提高肝细胞癌的诊断水平;3.血清THBS4可用于肝细胞癌患者术后监测和预后判断。