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[目的]已有大量的参考文献证明,氟化物能够引起肝脏的损伤。本试验通过添加不同浓度的钙研究氟化物对大鼠肝脏相关凋亡的蛋白及基因的表达量的影响,发现缓解氟中毒的最佳钙浓度,为防治氟中毒提供理论依据。[方法]雄性SD大鼠40只,平均体重120 g,随机分5组,每组8只,对照组(标准饲粮+蒸馏水)、氟组(标准饲粮+150 mg/L NaF水)、氟+低钙组(0.5%Ca饲粮+150mg/L NaF水)、氟+中钙组(1%Ca饲粮+150mg/L NaF水)、氟+高钙组(2%Ca饲粮+150 mg/L NaF水),自由采食120天,环境适宜。饲养期间观察大鼠的精神状态并记录大鼠的体重和采食量。试验120天后,记录体重并通过眼球采血后处死,收集血清并采集肝脏。称取肝脏质量,分析肝脏脏器比;用试剂盒测定血清中ALT、AST的活性;HE染色观察肝组织病理形态结构的改变;用免疫组化技术检测肝脏有关的凋亡蛋白Bax、Bcl-2、ROCK I、Cyto-C、BMP-2的表达量;应用实时荧光定量RT-PCR法测定肝脏组织中Bax、Bcl-2、ROCK I、Cyto-C、BMP-2基因的mRNA表达量。探讨钙对氟中毒大鼠肝组织的拮抗作用,分析钙对氟致大鼠肝细胞凋亡的影响,确定治疗慢性氟中毒的最佳钙剂量,为防治氟中毒供给有效的理论依据。[结果](1)对照组大鼠发育正常,精神状况良好,牙齿完整,被毛光滑。与对照组比较,氟组生长发育较差,牙齿有轻微的发黄,被毛暗淡;氟+高钙组的大鼠缓解较好,发育良好,牙齿外观改善,被毛有光泽。(2)与对照组相比,各组的肝脏脏器比没有明显变化。(3)与对照组比较,ALT活性在氟组下降极显著(p<0.01);与氟组相比,氟+中钙组和氟+高钙组中ALT活性均显著降低(p<0.05)。与对照组相比AST活性在氟组极显著升高(p<0.01);但与氟组相比,氟+中钙组AST活性显著下降,差异显著(p<0.05)。(4)氟组的T-AOC、GSH-PX、SOD活性较对照组均显著下降(p<0.05),MDA的含量显著升高(p<0.05);与氟组比较,T-AOC、MDA和SOD活性在氟+中钙组和氟+高钙组差异显著升高(p<0.05),GSH-Px表达水平在氟+中钙组中显著升高(p<0.05)。(5)HE染色结果表明:氟能够引起肝组织形态结构的损伤,细胞会发生颗粒变性、空泡和坏死,添加钙能够缓解氟化钠引起的组织损伤的不良现象。(6)免疫组化结果表明:与对照组比较,氟组Bax、Cyto-C、ROCK I、BMP-2的表达水平显著增加(p<0.001),Bcl-2的表达水平显著下降(p<0.001);与氟组比较,氟+中钙组和氟+高钙组的Bax、Cyto-C表达量显著下降(p<0.05),加钙组Bcl-2表达水平显著升高(p<0.05),氟+高钙组ROCK I的表达量显著下降(p<0.01),氟+高钙组BMP-2表达水平显著下降(p<0.05)。(7)荧光定量PCR技术测定结果:与对照组比较,氟组Bax、ROCK I、Cyto-C基因表达量均显著增加(p<0.01),Bcl-2基因表达量显著下降(p<0.01),BMP-2基因表达量显著升高(p<0.05);与氟组比较,Bax、ROCK I和Cyto-C基因在氟+低钙组和氟+中钙组表达量显著下降(p<0.05),Bcl-2基因在氟+中钙组和氟+高钙组表达量显著升高(p<0.01),氟+中钙组BMP-2基因表达量显著下降(p<0.05)。[结论]结果表明,氟化物能够影响大鼠的生长性能和肝脏相关的凋亡蛋白及基因的表达水平,钙能够缓解氟中毒的症状,中钙剂量(1%钙)是氟中毒大鼠肝脏凋亡改善的最佳浓度,摄入低钙可加重氟中毒诱导肝细胞凋亡。