猪精液冷冻保存的研究

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本试验以解冻后精子活力和顶体完整率为指标,筛选出了猪冻精适宜的稀释液配方,确定了较佳冷冻保护剂的最适浓度,探讨了适宜的冷冻方法、解冻温度以及添加剂对精液冷冻的影响,研究结果如下: 1.直接投入液氮法和液氮熏蒸法之间的冷冻效果差异不显著(P>0.05),二者冷冻效果优于程序仪冷冻法。但是使用0.5ml细管冷冻时,液氮熏蒸法优于直接投入液氮法。冷冻方法相同时,使用0.25ml、0.5ml和5ml细管冷冻,解冻后各组间精子活力差异显著(P<0.05),0.25ml细管优于0.5ml细管,0.5ml细管优于5ml细管。但液氮熏蒸时0.25ml和0.5ml细管之间差异不显著(P>0.05)。 2.使用卵黄稀释液稀释精液,然后用冷冻液Ⅱ进行冷冻效果明显优于使用BTS和冷冻液Ⅰ。 3.在40℃、50℃水浴中解冻的精子活力差异不显著(P>0.05),但是都明显优于在30℃水浴中解冻的效果。使用0.25mi细管冷冻时,解冻温度40℃明显优于50℃(P<0.05)。解冻温度相同时,使用0.25ml、0.5ml和5ml细管冷冻精液,解冻后精子各组间活力差异显著(P<0.05),0.25ml细管优于0.5ml细管,0.5ml细管优于5ml细管。但50℃解冻时0.25ml和0.5ml细管之间差异不显著(P>0.05)。 4.离心速率分别为1200rpm、1800rpm、2400rpm时,解冻后各组间精子活力和顶体完整率差异不显著(P>0.05)。 5.使用最终甘油浓度为2%、3%的冷冻液,解冻后精子活力差异不显著(P>0.05),但是均明显优于4%的甘油浓度的冷冻效果。使用最终甘油浓度为2%、3%、4%的冷冻液,解冻后各组间精子顶体完整率差异均不显著(P>0.05)。最终甘油浓度相同时,使用0.25ml、0.5ml和5ml细管冷冻,解冻后各组间精子活力差异显著(P<0.05),0.25ml细管优于0.5ml细管,0.5ml细管优于5ml细管;0.25ml和0.5ml细管之间顶体完整率差异不显著(P>0.05),但都优于5ml细管。 6.解冻后孵育15min和30min精子活力差异不显著(P>0.05),但是孵育45min后精子活力明显下降,60min后存活精子已经很少。  7.在冷冻液中添加0.5%、1%的TritonX-100、对照组之间差异显著(P<0.05),添加TritonX-100明显降低解冻后精子的活力和顶体完整率,并且随着添加量的增加,活力和顶体完整率逐渐降低。 8.采用选出的最佳稀释液、冷冻程序、解冻液、解冻程序制备精液,并给3头发情母猪输精,其中1头成功妊娠。
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