论文部分内容阅读
皮肤是人体最大的器官,承担着重要的生理功能,它覆盖于我们身体的所有部分,它的存在使人体内各种组织和器官免受物理性、化学性、机械性和病原微生物的侵袭。近年来,皮肤癌的发病率逐年升高,已严重影响到人们的身体健康。皮肤癌的发生主要是由于表皮细胞不可控的增长所致,皮肤癌分为基底细胞癌(Basal cell carcinoma,BCC)、鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)和黑色素瘤(Melanoma)三种类型,它们分别起源于表皮的基底细胞、鳞状细胞和黑色素细胞,其中基底细胞癌和鳞状细胞癌又统称为非黑素瘤(Non-Melanoma)。鳞状细胞癌(SCC)是皮肤癌中的第二大类型,它的发生与紫外辐射有关。在生物学和医学研究中,通常采用经典的DMBA/TPA两步致癌法诱导小鼠皮肤鳞状细胞癌的生成,进而对其进行深入研究。G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor,GPCR)超家族是与信号转导相关的最大的细胞表面分子家族,它与肿瘤的生长和转移密切相关。GPR48,又称LGR4 (Leucine-rich repeat containing G-protein coupled receptor 4),是孤儿受体家族中的一员,它在很多组织中都有表达,并广泛地参与细胞增殖、分化、迁移,调控细胞的各类生理活动。但GPR48/LGR4在皮肤癌的发生发展中是否起着重要的作用,目前研究甚少。本实验利用Gpr48/Lgr4野生型和基因敲除型小鼠,采用经典的DMBA/TPA两步致癌法诱导小鼠皮肤鳞状细胞癌的生成,试图探究Gpr48/Lgr4在皮肤癌的发生和发展中的作用。通过20周的模型构建实验,我们发现野生型小鼠背部出现了数目不等、大小不一、恶性程度各异的肿瘤,而Gpr48/Lgr4基因敲除型小鼠的背部则几乎没有肿瘤的形成,这表明Gpr48/Lgr4的缺失严重影响了两步致癌法诱导肿瘤形成的过程。为了进一步探究出现此现象的机制,我们分别在体内和体外进行了一系列实验：体内水平上,我们利用HE染色、免疫组化染色、Real-time PCR、Westernblot等方法检测了表皮细胞增殖情况、炎症因子表达情况及ERK信号通路相关蛋白的表达情况,发现野生型小鼠的表皮细胞增殖、炎症及信号通路蛋白的激活情况都显著高于基因敲除型小鼠,而以上的这些指标都与肿瘤的发生密切相关；体外水平上,我们选用人皮肤鳞癌细胞A431,利用RNA干扰的手段,对内源性Gpr48/Lgr4进行低表达,进而探究Gpr48/Lgr4低表达对A431生长、克隆形成、细胞周期及ERK信号通路相关蛋白表达的影响,实验表明,Gpr48/Lgr4低表达后,确实降低了A431细胞的生长速度、克隆形成率,细胞对TPA刺激所反应出来的ERK信号通路相关蛋白的活化也受到了影响。总之,这些实验结果初步揭示了Gpr48/Lgr4在两步致癌法诱导皮肤癌形成中具有重要的作用,Gpr48/Lgr4可能是通过影响ERK信号通路相关蛋白表达从而影响肿瘤的发生,因此Gpr48/Lgr4很可能成为皮肤鳞状细胞癌治疗的新的靶点。