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萜类化合物(terpenoids)是植物中最大一类的天然产物,在植物的生命周期中发挥着多重作用。在不同的亚细胞结构中,萜类合成酶(TPS)催化GPP、FPP、GGPP分别产生单萜、倍半萜和二萜等萜类化合物的基本骨架,其基因表达受到多种因素的调控。青蒿(Artemisia annua L.)的单萜合成酶QH6催化以GPP为底物合成(-)-蒎烯。其基因表达具有光节律性。qh6也是第一个被证明受生物钟调控的萜类合成酶基因。
本研究分析了qh6光节律性的分子机理。首先,通过同源序列分析的策略,以qh6的cDNA序列为基础,获得了qh6基因全长序列;并通过Genome Walking,获得了该基因的上游~2448bp序列;同时利用Southern Blot分析证明该基因在青蒿中为单拷贝基因。对启动子序列的分析显示,在-424处具有一个推断的HY5结合位点(HY5-AT,TGACACGTGGCA)。通过构建以不同启动子片段驱动GUS基因的载体,并进行转基因分析,结果显示,带有HY5-AT的启动子序列能够使GUS基因的表达具有光节律性。同时,对其他转基因植株的分析也证明了qh6在青蒿中表达的组织特异性(幼嫩叶片中),并发现其在叶片中的表达部位主要是在叶片的表皮毛上。