外泌体是由细胞分泌的囊泡,粒径为30 nm-150 nm,密度为1.10-1.18 g/m L,并且含有特定的脂质、蛋白质、m RNA、mi RNA、DNA。在细胞与细胞之间的通讯中起着重要作用。然而,由于其粒径小、丰度小、密度低,且细胞分泌产生的囊泡不仅包括外泌体,还包括粒径稍大的微囊泡分离起来非常困难。目前常用的分离手段包括超速离心,化学沉淀,免疫分离,然而,这些手段目前仍存在一些弊端,如超速离心法成本高且效率低,化学沉淀会引入蛋白质杂质,免疫分离会破坏外泌体的膜结构,影响外泌体的生物活性。外泌体的高效分离仍然面临巨大挑战。针对目前外泌体分离纯化过程中存在的问题,本课题设计了基于生物正交反应的磁分离方法,二苯并环辛炔在经1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐及N-羟基琥珀酰亚胺活化后与磁珠表面的羧基发生酰胺化反应得到功能化磁珠,N,N-二甲基乙醇胺与1,2-二溴乙烷反应后的产物与叠氮化钠继续反应得到叠氮乙基胆碱,随后叠氮乙基胆碱通过click反应连接到细胞膜上,细胞经过胞吞等一系列过程后使得外泌体膜表面带有叠氮基团,通过生物正交反应使磁珠与外泌体相连,经磁分离将外泌体分离出体系,随后通过碱性磷酸酶（ALP）水解磷脂键从而使磁珠与外泌体分离,获得较纯净的外泌体。随后对用此方法提取的外泌体进行了评价,通过TEM、NTA、Western Blot等实验对此方法提取的外泌体进行了鉴定,结果表明,此方法成功提取出外泌体,并且提取的外泌体粒径与超速离心法提取的相比更集中于100 nm左右,浓度为4×105个/m L,外泌体上的蛋白质未受到任何损伤,证明此方法的确做到了高效分离。此外,在肿瘤的发展过程中外泌体同样发挥着极其重要的作用。以往对肿瘤的研究发现在化疗过程中肿瘤组织中的某些细胞分泌的外泌体会增加肿瘤细胞的耐药性,促进转移等,肿瘤组织中的肿瘤干细胞同样会分泌外泌体对普通肿瘤细胞产生影响,导致肿瘤治疗失败。但是目前肿瘤干细胞经化疗后分泌的外泌体对普通肿瘤细胞有什么样的影响尚未可知。因此,为探讨肿瘤干细胞外泌体对肿瘤治疗的影响,该课题利用功能化磁珠体提取了化疗刺激下的肿瘤干细胞外泌体,将外泌体与普通肿瘤细胞共孵育,探究外泌体对普通肿瘤细胞是否产生影响及产生了什么影响。并通过对细胞活力、成球能力、迁移、侵袭,HE染色,干性标志物表达等实验,对加入外泌体诱导后的普通肿瘤细胞的干性表征进行探究,发现了肿瘤干细胞经化疗后分泌的外泌体对周围的普通肿瘤细胞有驯化能力使之去分化向干细胞转化。这对肿瘤治疗提供了新思路,在治疗的同时若能抑制干细胞分泌外泌体,治疗效率将会大大提高。