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[目的]
CTGF(Connective tissue growth factor CTGF)作为TGF-β致纤维化作用的直接下游效应介质，促进胬肉组织中成纤维细胞增殖，并且是Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的介导者促进翼状胬肉的发生发展。它的促纤维化作用受到人们的重视。抑制其表达成为人们研究抑制纤维化疾病治疗的靶点。本研究应用结缔组织生长因子短发夹RNA(CTGFshRNA)表达质粒转染翼状胬肉成纤维细胞，研究其对CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响。
[方法]
通过组织培养法获得翼状胬肉成纤维细胞并进行纯化用免疫组织化学的方法鉴定，取3-6代细胞分为三个时间段，每个时间段设三个对照组，将已构建成功含有绿色荧光蛋白(EGFP)的CTGFshRNA质粒以转染试剂Lipofectamine2000按比例为1:2:5转染胬肉成纤维细胞。收集细胞提取蛋白质和RNA，应用WesternBlotting检测翼状胬肉成纤维细胞中CTGF蛋白质表达。用应用Real-timeqRT-PCR和RT-PCR技术分别检测翼状胬肉成纤维细胞中Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA表达水平。
[结果]
通过组织培养获得细胞抗波形蛋白阳性，符合成纤维细胞的形态学及免疫学特征。各实验组与空白对照组相比CTGFshRNA表达载体组的24h、48h、72h CTGF蛋白质表达降低约(634±4)％、(74±5)％、和(36±7)％(P<0.01)。Ⅰ型胶原mRNA分别降低(42.8±7)％(39.7±9)％(40.3±8)％(P<0.01)。Ⅲ型胶原mRNA分别降低(35±6)％、(33±4)％、(39±7)％(P<0.01)。
[结论]
针对人CTGFmRNA设计合成的CTGFshRNA可有效抑制翼状胬肉成纤维细胞CTGF蛋白Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达。CTGFshRNA表达质粒可能对翼状胬肉的纤维化进展具有阻抑作用。