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本研究利用四川地区鸭疫里默氏杆菌（RA）优势血清型(B8、B12、B15)全菌体裂解抗原建立了检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的Dot-ELISA方法。用单株菌的裂解抗原分别包被硝酸纤维素膜,进行Dot-ELISA,结果显示:抗原最适包被浓度为B8:0.091 mg/ml,B12:0.094 mg/ml,B15:0.333 mg/ml。将三株菌的裂解抗原等量混合,包被硝酸纤维素膜,进行Dot-ELISA,确定了最佳反应条件为:最适反应条件为4℃过夜;含5%BSA的PBST作封闭液反应45 min;含10%小牛血清的PBST作为血清和酶标抗体的稀释液;PBST作洗涤液;待检血清反应条件为37℃作用60 min酶标抗体反应浓度为0.25μg/mL（1:200倍稀释）,反应条件为37℃作用50 min;底物反应时间为10 min。研究选择间接血凝试验（IHT）作为Dot-ELISA的对照试验。Dot-ELISA与IHT共同检测20份鸭血清,比较阳性检出率,结果显示Dot-ELISA阳性19份（占95%）;IHT阳性14份（占70%）。Dot-ELISA与IHT共同检测8份鸭血清比较测定的效价,结果显示Dot-ELISA法和IHT法具有很好的相关性,且Dot-ELISA检出的抗体效价比IHT高16～64倍。研究通过交叉试验验证了制备的快诊膜具有良好的特异性:不与葡萄球菌阳性血清,巴氏杆菌阳性血清,大肠杆菌阳性血清等反应,仅与鸭疫里默氏杆菌阳性血清反应。批内重复试验用同一批制备的快诊膜检测5份不同滴度的阳性血清,批间重复试验用3次不同批次裂解的抗原制备的快诊膜同时检测5份不同滴度的阳性血清,结果均表明该法的重复性良好。本试验制备的诊断膜片经保存期试验证明可至少保存6个月,其特异性、灵敏性不变。试验自制了鸭疫里默氏杆菌3价蜂胶灭活疫苗对三组试验雏鸭进行免疫。第一组雏鸭仅在7d进行一次免疫,第二组在首免后7d进行再次免疫,第三组为空白对照。对免疫鸭抗体水平检测于首免后3d、6d、9d、13d、20d、27d、34d、41d、48d、55d和69d进行。用单株菌的超声波裂解抗原作包被抗原测定其在免疫鸭体内抗体水平的动态反应性,Dot-ELISA结果显示雏鸭免疫后3d～6d即可产生免疫力,3株菌的抗体水平均随着时间的延长逐渐升高。B8菌株1次免疫组的抗体水平在20d左右达到峰值,为1:512,2次免疫组的抗体水平在20d左右达到峰值,为1:2048;B12菌株1次免疫组的抗体水平在20d左右达到峰值,为1:256,2次免疫组的抗体水平在20d左右达到峰值,为1:1024;B15菌株1次免疫组的抗体水平在27d左右达到峰值,为1:512,2次免疫组的抗体水平在27d左右达到峰值,为1:2048。3株菌的这种高抗体水平一直维持至免疫后48d,之后缓慢下降,在69d时的抗体水平均高于13d。利用Dot-ELISA检测鸭疫里默氏杆菌抗体3h内即可完成,结果客观,仅需肉眼就可判断,不需要借助其他仪器。结果表明该法简便、快速、灵敏、特异、重复性好,结果稳定可靠,快诊膜便于寄送、保存;各种试剂、材料均可做到标准化,适合各基层兽医站和规模化养鸭场进行鸭疫里默氏杆菌的抗体监测、诊断和疫病普查。