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肿瘤已经成为威胁人类健康的重要疾病,随着生物学的发展,人类对于机体及肿瘤生物学认识不断深化,肿瘤的治疗已经成为综合治疗,肿瘤免疫治疗成为肿瘤生物治疗的一个热点和重点。在各种肿瘤疫苗策略中核酸疫苗作为一种新的肿瘤疫苗策略而备受关注。MAGE抗原家族成员在多种类型和部位肿瘤中均有表达而在正常组织不表达,成为肿瘤免疫治疗的重要靶抗原。本论文从MAGE-A3肿瘤核酸疫苗的的基因修饰入手探讨如何构建有效的肿瘤核酸疫苗,促进抗原提呈,达到激发肿瘤保护反应,获得有效抗肿瘤免疫效应的目的。 研究的第一部分为MAGE-A3基因扩增。方法:计算机辅助引物设计,采用RT-PCR技术从Mel-526细胞RNA中克隆出MAGE-A3基因的cDNA并进行相应分析。结果:成功扩增MAGE-A3基因,为进一步研究奠定基础。 研究的第二部分为MAGE-A3稳定表达模型的构建。方法:利用克隆出的MAGE-A3基因,构建带有绿色荧光蛋白基因真核表达载体,利用电穿孔技术将该载体转移至小鼠肺癌模型LA795细胞,筛选稳定表达克隆株。结果:经筛选得到稳定表达MAGE-A3基因的LA795(MAGE-A3)细胞亚株,成功构建稳定表达MAGE-A3基因的小鼠肺癌动物模型,其体内体外生物学性状与源细胞无显著差别,可以作为中MAGE-A3肿瘤治疗临床前研究模型。 研究第三部分为MAGE-A3重组核酸疫苗的构建,基因修饰及肿瘤保护效能研究。方法:采用“预制件”构建的方式构建了重组载体MAGE-A3核酸疫苗及报告基因载体,对构建的重组载体进行信号肽和IgG Fc基因修饰,并对构建的肿瘤疫苗激发的免疫效能和肿瘤保护效能进行初步研究。结果:成功构建MAGE-A3肿瘤核酸疫苗并对该疫苗进行各种基因修饰。结论:对MAGE-A3重组核酸疫苗进行信号肽和IgG的双重修饰,可以有效激发的免疫反应和肿瘤抑制效果,具有一定的临床应用前景