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第一部分创伤性脑损伤环境下小胶质细胞和星形胶质细胞的反应特点目的:研究创伤性脑损伤环境下小胶质细胞和星形胶质细胞的反应特点以及相关蛋白的表达规律。方法:建立创伤性脑损伤小鼠模型,运用免疫荧光、蛋白印记技术、免疫组化等技术检测小胶质细胞和星形胶质细胞的形态和数量改变,同时检测组织中TLR4/My D88/NF-κB信号通路以及HMGB1、IL-1β等分子的表达改变。结果:在小鼠遭受TBI后,脑组织损伤灶区域出现明显水肿、神经元凋亡、BBB破坏,小胶质细胞和星形胶质细胞均出现显著增殖,小胶质细胞形态由正常状态下的长分支状变为具有短分支的阿米巴样;在TBI后,TLR4/My D88/NF-κB信号通路出现显著活化,同时HMGB1、IL-1β等分子表达显著上调。采用TBI离体模型作用后发现,抑制HMGB1后可以显著抑制小胶质细胞和星形胶质细胞之间的促炎性反应。结论:TBI后小胶质细胞和星形胶质细胞出现显著增殖活化,伴随着TLR4/My D88/NF-κB信号通路显著活化以及HMGB1、IL-1β等分子表达显著上调,HMGB1是小胶质细胞和星形胶质细胞之间相互作用的重要因子。第二部分离体环境下小胶质细胞和星形胶质细胞的促炎性相互作用和机制目的:研究离体环境下小胶质细胞和星形胶质细胞的促炎性相互作用特点和机制。方法:采用LPS刺激的原代小胶质细胞和星形胶质细胞为离体研究模型,通过条件培养基的方法探究二者的相互作用,运用免疫荧光、蛋白印记技术、实时定量PCR等技术研究其相关信号通路活化情况。结果:在离体模型LPS作用后,小胶质细胞和星形胶质细胞TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关蛋白以及炎性因子IL-1β和i NOS表达上调,小胶质细胞增殖明显;在TLR4特异性抑制剂TAK242和NF-кB特异性抑制剂BAY117082的分别作用下,TLR4、My D88以及NF-кB的磷酸化水平下降,IL1β和i NOS表达下调。此外,在利用LPS作用后的小胶质细胞和星形胶质细胞的条件培养基分别刺激星形胶质细胞和小胶质细胞时,后两者的IL1β和i NOS表达较LPS单独刺激明显上调,且此效应可以被TAK242和BAY117082分别抑制。结论:LPS可以分别介导小胶质细胞和星形胶质细胞通过TLR4/NF-κB信号通路产生促炎性反应,此外,小胶质细胞和星形胶质细胞可以通过TLR4/NF-κB信号通路分别促进星形胶质细胞和小胶质细胞的炎症反应。第三部分HMGB1抑制剂对TBI小鼠模型神经功能、BBB的修复作用和机制目的:研究TBI微环境下HMGB1介导小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用。方法:建立TBI小鼠模型,采用HMGB1抑制剂EP和GA抑制HMGB1的表达,采用免疫荧光、蛋白印记技术、实时定量PCR等技术研究其相关信号通路活化情况。结果:在TBI抑制剂EP和GA的作用下,小鼠神经功能损伤和BBB损伤显著减弱,促炎性小胶质细胞和星形胶质细胞数量显著降低。结论:HMGB1在TBI微环境中发挥重要作用,小胶质细胞和星形胶质细胞通过HMGB1产生相互促炎性反应,从而加重TBI后脑组织损伤。抑制HMGB1的表达后,可以促进TBI小鼠早期的神经功能恢复,减轻BBB损伤。