补肾解毒法与健脾解毒法对HBV慢性感染不同阶段患者外周血树突状细胞介导的T淋巴细胞功能影响的研究

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目的:拟运用HBV慢性感染过程不同阶段的患者外周血DCs与T淋巴细胞体外共培养的细胞模型和中药血浆药理实验方法,比较补肾解毒、健脾解毒哪种方法更能促进DCs活化特异性T淋巴细胞,哪种方法是提高HBV慢性感染后免疫细胞功能、免疫学应答恢复,治疗慢性乙型肝炎的主要方法,为临床提高中医治疗慢乙肝的疗效提供客观依据、治疗思路和研究基础。方法:本研究通过前后抽取HBV慢性感染免疫耐受期和免疫清除期共16例患者外周血80ml,另设健康对照组8例,分离培养出成熟的树突状细胞,在培养过程中采用补肾解毒与健脾解毒复方中药药物血浆分别对DCs进行体外干预,并负载HBV核心蛋白,然后与自身的T淋巴细胞共培养72小时,应用流式细胞技术检测T细胞表面分子CD3、CD28、 CD4、CD8及PD-1的表达水平,并用ELISA试剂盒检测T细胞上清液中IFN-γ分泌水平。比较哪种方法干预对免疫细胞功能的恢复影响更大。结果:1.干预前的T淋巴细胞(未经中药血浆干预也未与DCs共培养的T细胞)上CD4、CD28的表达水平,健康人组明显高于免疫耐受组和免疫清除组,而以免疫耐受组的患者表达最低,差异有统计学意义(p<0.05)。CD8、PD-1的表达健康人组明显低于免疫耐受组和免疫清除组,其中又以免疫耐受组的表达最高,差异有统计学意义(p<0.05)。CD3的检测结果健康人和免疫清除期组患者差异无显著意义(p>0.05),但耐受期组患者表达明显低下(p<0.05)。上清液中分泌的IFN-γ水平在健康人和免疫清除期组患者差异无显著意义(p>0.05),在耐受期组患者分泌水平明显低下(p<0.05)。2.在免疫耐受组和免疫清除组的HBV慢性感染患者经补肾解毒(六味甘露中剂量)和健脾解毒(四君甘露小剂量)药物血浆干预后的DC与T细胞共培养,检测其T细胞表面分子的表达率。两种方法在一定程度上都能提高CD3、CD4、CD28的表达水平和上清液中分泌的IFN-γ水平,降低CD8、PD-1的表达水平。结论:1.慢性HBV感染免疫清除期和免疫耐受期患者存在T淋巴细胞功能的缺陷,以免疫耐受期患者细胞免疫功能是最低的。2.通过补肾解毒、健脾解毒药物血浆在一定程度上能够促进HBV慢性感染患者树突状细胞的成熟,使得DCs激活T细胞的功能明显提高,促进T细胞表面分子的表达,并且补肾解毒法对慢性HBV感染免疫耐受期患者细胞免疫学功能的影响更为显著。
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