肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是由多种原因引起的一种恶性肺血管疾病,以肺动脉压力及肺血管阻力进行性升高为主要特点。其临床症状为呼吸困难、胸痛、咯血、头晕或晕厥、咯血等。肺动脉高压的病因和机制目前尚未完全清楚,其发生涉及细胞异常、分子介质和遗传因素等多种途径,内皮细胞、平滑肌细胞及血小板、遗传因素等在其发病中也起到重要作用。肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡失衡,肺动脉重构是肺动脉高压的一个最为重要的特征。平滑肌细胞的增殖增生,凋亡减少,导致肺动脉中膜增厚,血管腔相对狭窄,肺血管平均阻力增加,引起肺动脉压力的升高。血管重构是多条维持血管结构和功能完全性的信号通路调节异常的结果[1]。研究表明肺小动脉血管的痉挛、内膜增生、重构或闭塞及小动脉数量减少在肺动脉高压的发生、发展过程中起着非常重要的作用[2]。目前本病各种治疗效果皆不佳,有着较高的死亡率,患者生活质量较差。目前对于肺动脉高压的治疗仍以药物治疗为主,虽然这些靶向治疗药物能改善患者生活质量,延长患者的生存时间,但是如果长期服用则存在价格昂贵、耐药性高、副作用大等缺点。因此,开展中医药对肺动脉高压防治的研究有着十分深远的意义。参附益心颗粒原名心衰康颗粒,是根据我院名老中医孙建芝经验研发而成,目前已经被证实此方具有明显改善心功能,保护心血管,增加心肌张力,增加肾脏血流量和排尿量的功效。在研究的过程中我们发现参附益心颗粒能够影响血管紧张素-2和Bcl-2等与肺动脉高压相关的指标,因此我们猜想参附益心颗粒是否对肺动脉高压有一定的影响。本实验应用参附益心颗粒对野百合碱诱导的肺高压大鼠进行干预,观察参附益心颗粒对肺高压大鼠血流动力学及内皮功能血管重构的影响。目的:通过在体动物实验研究,明确参附益心颗粒能够降低野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠的右心室收缩压(RVSP)、右心室舒张压(RVDP)、平均肺动脉压(m PAP)及肺血管阻力(PVR),增加心输出量(CO),改善心指数(CI),降低大鼠右心肥厚指数(RVHI),改善大鼠右心衰竭和预后相关的指标,影响大鼠肺血管内皮功能血管重构。方法:根据方剂需要选择符合要求的中药饮片,按照参附益心颗粒组方一次性制成成药参附益心颗粒。将40只SPF级Wistar大鼠,随机分为4组,空白组、模型组、西药组和参附益心颗粒组,每组10只。将野百合碱(60mg/Kg)一次性皮下注射于模型组、西药组和参附益心颗粒组大鼠,制备肺动脉高压大鼠模型,空白组则不予处理。4周以后,进行药物干预,参附益心颗粒组大鼠灌服参附益心颗粒,西药组大鼠灌服西地那非,模型组灌服等量的生理盐水,空白组大鼠不予处理。在整个实验过程中,注意观察和记录各组大鼠的一般情况。灌胃4周后,分别对各组大鼠血流动力学指标进行测量计算,包括rvsp、rvdp、mpap,pvr、co、ci。处死大鼠后,观察大鼠心脏和肺组织颜色,光滑度,淤血水肿情况,测量大鼠rvhi。备病理切片分别进行he和sabc染色,镜下观察肺小动脉形态学改变,测量计算肺小血管管壁厚度与血管外径比值(wt%),利用免疫组化法检测大鼠肺小血管壁内平滑肌细胞内皮素-1a型受体阳性的表达指数。利用elisa法检测内皮素-1浓度。检测各组大鼠几项与肺动脉高压的预后相关的生化指标。结果:1.大鼠一般情况观察结果从mct皮下注射制备大鼠肺动脉高压模型开始观察记录各组大鼠的一般情况。制备模型后,空白组大鼠活动量正常,毛发柔软细腻,光泽鲜亮,呼吸稳定,食欲正常。其他各组大鼠1周后均不同程度地出现动物活动量减少,食欲下降等改变,2周后大鼠毛发直竖,灰暗而且无光泽,呼吸明显急促加快,消瘦;4周之后大鼠已明显消瘦,呼吸困难,口鼻及爪甲明显发绀,大多数出现右心衰竭的严重症状,少数死亡。药物干预后,西药组和参附益心颗粒组大鼠较空白组相比,大鼠的精神状态、日常活动、毛发、呼吸、饮食量等均得到了不同程度的改善,且大鼠的体重增加比模型组相比明显加快,差异具有明显统计学意义。说明参附益心颗粒能够改善肺动脉高压大鼠的一般情况。2.血流动力学指标测定血流动力学指标测定结果,模型组、西药组和参附益心颗粒组mpap、rvsp、rvdp和pvr均明显增高,其中模型组明显高于西药组和参附益心颗粒组,差异具有显著统计学意义。西药组和参附益心颗粒组相比差异无统计学意义。模型组、西药组和参附益心颗粒组co和ci均明显低于空白组,模型组明显低于西药组和参附益心颗粒组,差异有显著统计学意义。西药组同参附益心颗粒组相比,差异无明显统计学意义。3.心脏和肺组织大体观剪开胸腔之后,可见空白组大鼠心脏及肺组织呈粉红色,表明光滑,富有弹性,未见淤血和水肿。模型组大鼠肺组织色暗红,肿胀,表面粗糙有弥漫瘀血点,肺组织质地变硬,右心室明显增厚。西药组和参附益心颗粒上述观察结果较模型组明显改善,参附益心颗粒能够改善大鼠肺组织瘀血水肿情况。4.各组大鼠rvhi测定模型组、西药组和参附益心颗粒组的rvhi较空白组明显升高,差异有显著统计学意义。西药组和参附益心颗粒组相比,差异无显著统计学意义。说明参附益心颗粒能够降低大鼠右心肥厚指数。5.病理形态学观察病理组织he染色,光镜下观察空白组,管壁清晰可见,未见中膜平滑肌增厚,内皮细胞分布均匀,未见炎性细胞浸润。模型组大鼠,小动脉内膜和平滑肌均可见增生增厚,内皮细胞分布不均匀,出现变性肿胀,甚至于坏死脱落,可见炎性细胞浸润,血管腔明显狭窄。与模型组相比,西药组和参附益心颗粒组以上观察指标明显改善。测量并计算肺小血管管壁厚度与血管外径比值(wt%),参附益心颗粒组和西药组与模型组相比,大鼠管壁厚度与血管外径比值明显降低,具有显著统计学差异,说明参附益心颗粒能够改善肺动脉高压大鼠血管重构。6.elisa法测内皮素-1和免疫组化法检测内皮素-1a型受体阳性表达指数elisa法测得模型组、西药组和参附益心颗粒组血清中内皮素-1浓度值均高于空白组,参附益心颗粒组明显低于模型组,差异有显著统计学意义。说明参附益心颗粒能够降低肺动脉高压大鼠血浆内皮素-1的浓度。免疫组化法测得内皮素-1a型受体阳性表达指数。模型组、西药组和参附益心颗粒组明显高于空白组,西药组和参附益心颗粒组低于模型组,参附益心颗粒组明显低于模型组,两组之间差异无显著统计学意义。说明参附益心颗粒能够减少肺动脉高压大鼠的内皮素-1a型受体阳性表达指数。说明参附益心颗粒能够改善肺动脉高压内皮功能。7.肺动脉高压相关预后指标分离血清后测量各组大鼠的生化指标脑钠肽(bnp)、肌钙蛋白i(tnti)、尿酸(ua)、血清总胆红素(tbil),其他各组与空白组相比,数值均不同程度的升高,但西药组和参附益心颗粒组较模型组相比数值降低,参附益心颗粒组同模型组相比,差异具有显著统计学意义。说明参附益心颗粒能够改善肺动脉高压大鼠与肺动脉高压相关的生化指标,改善预后。结论:1.大鼠皮下一次性注射野百合碱(60mg/kg)后,制备肺动脉高压模型,并模拟肺血管重塑的病理改变,模型制备成功后的大鼠,内源性内皮素-1a表达增加,肺动脉压力增高,出现明显右心室肥厚。2.参附益心颗粒对mct诱导的肺动脉高压大鼠有一定预防保护作用。其能明显改善模型大鼠的一般生活情况、降低死亡率,能有效降低肺动脉大鼠的rvsp、rvdp、mpap和pvr,增加肺高压大鼠的co和ci,降低rvhi和wt%的比例,降低内皮素-1浓度,减少肺高压大鼠的肺小血管壁内皮素-1A受体的表达,改善肺动脉高压相关的生化指标。说明参附益心颗粒能够影响野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠血流动力指标,改善内皮功能影响血管重构。