【摘 要】
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高脂血症是临床上常见的以血浆甘油三酯（triglyceride,TG）和/或胆固醇升高为特征的脂质代谢紊乱。肝脏是维持脂质代谢稳态的枢纽器官,过多的脂质沉积在肝脏会导致非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）。NAFLD是最为普遍的慢性肝脏疾病,目前仍没有特异性治疗药物,主要的治疗手段以减肥和调节饮食为主。课题组前期利用动脉粥样硬化患者血浆筛
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81974045）； 国家自然科学基金资助项目（81772074）； 广州市科技计划项目（201804020002）；
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高脂血症是临床上常见的以血浆甘油三酯（triglyceride,TG）和/或胆固醇升高为特征的脂质代谢紊乱。肝脏是维持脂质代谢稳态的枢纽器官,过多的脂质沉积在肝脏会导致非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）。NAFLD是最为普遍的慢性肝脏疾病,目前仍没有特异性治疗药物,主要的治疗手段以减肥和调节饮食为主。课题组前期利用动脉粥样硬化患者血浆筛选十二肽库,并通过噬菌体展示技术建立人抗体单链可变区片段（human single-chain variable fragments,scFvs）库,将scFv重组至pcDNA3载体表达人源化IgG1（以下简称为14mAb）。前期结果表明14mAb能使高脂饮食Apoe-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积减少约40%。同时14 mAb可直接作用于肝细胞,促进胆固醇逆向转运以及胆汁酸的合成与排泄。本课题拟在前期研究的基础上进一步明确14 mAb对于肝脏的效应,探究14 mAb对肝脏脂质代谢的调节作用及其调控机制。采用Apoe-/-小鼠进行高脂喂养20周诱导高脂血症。检测小鼠血清TG、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholestrol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholestrol,HDL-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）的含量以及小鼠肝脏TG含量。对小鼠肝脏组织进行HE染色以及油红O染色。并进行小鼠肝脏转录组测序（RNA Sequencing,RNA-Seq）,分析组间关键差异基因。体外实验利用棕榈酸和油酸（2:1）构建小鼠原代肝细胞脂肪变性模型,BODIPY 493/503染脂滴,激光共聚焦显微镜观察脂滴并用流式细胞仪对脂滴进行定量。利用siRNA敲低Aadac、FcRn的表达,qPCR以及Western Blot检测Aadac、Foxa1、p-PKCδ和FcRn的mRNA和蛋白表达水平。构建Aadac启动子荧光素酶报告基因,通过截短和突变位点分析Aadac的转录调控。利用染色质免疫共沉淀技术（chromatinimmunoprecipitation,ChIP）检测转录因子Foxa1对Aadac的转录调控作用。研究结果表明,14 mAb能显著降低高脂喂养Apoe-/-鼠血清LDL-C和TG的水平,同时能显著减少小鼠肝脏TG含量。小鼠肝脏RNA-Seq结果提示14mAb能显著增加Aadac的表达。体外实验表明14 mAb能显著恢复FFA引起的小鼠原代肝细胞Aadac的表达降低,减少FFA引起的细胞脂滴的沉积,Aadac siRNA能显著逆转这一效应。荧光素酶报告基因以及ChIP-PCR结果提示Aadac启动子上Foxa1反应元件-182/-172bp在14 mAb调控Aadac表达作用中起着关键作用。同时,14 mAb抑制PKCδ的磷酸化进而增加Foxa1的表达。敲低小鼠原代肝细胞FcRn后能逆转14 mAb引起的PKCδ的磷酸化水平下降,Foxa1以及Aadac的表达增加。本研究证实14 mAb通过Aadac维持小鼠肝脏TG稳态,其机制可能是通过FcRn/PKCδ/Foxa1途径调控肝细胞Aadac的表达。
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